鞘氨醇激酶1對(duì)大鼠急性重癥胰腺炎肺損傷的作用研究.pdf

1、目的:通過(guò)選取高效、穩(wěn)定的方法制備急性胰腺炎動(dòng)物模型，誘發(fā)肺損傷，比較正常組、假手術(shù)組、胰腺炎組和鞘氨醇激酶1抑制組，包括鞘氨醇激酶1的蛋白表達(dá)及先關(guān)的各項(xiàng)指標(biāo)，研究鞘氨醇激酶1在大鼠急性重癥胰腺炎肺損傷中的作用，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法:將120只SD大鼠隨機(jī)分成4組:正常組、假手術(shù)組、胰腺炎組、鞘氨醇激酶1抑制組，每組30只，其中每組15只用來(lái)觀察24h生存率。正常組不進(jìn)行任何操作，假手術(shù)組僅行開(kāi)關(guān)腹手術(shù)，胰腺炎組采

2、用微量注射泵對(duì)大鼠胰膽管進(jìn)行逆行性注射?；撬崮懰徕c的方法制作大鼠急性重癥胰腺炎模型;鞘氨醇激酶1抑制組在制備大鼠急性胰腺炎模型前從大鼠尾靜脈注射鞘氨醇激酶1抑制劑5c的稀釋液，余同胰腺炎組模型制備方法。分別觀察各組生存率，留取血清進(jìn)行血清淀粉酶和血清脂肪酶測(cè)定，進(jìn)行血清TNF-α和IL-1β的測(cè)定，對(duì)左肺組織行組織髓過(guò)氧化物酶活性測(cè)定，取左肺進(jìn)行肺泡灌洗測(cè)定蛋白含量，取肺組織和胰腺組織行組織病理學(xué)檢查，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)和流式

3、細(xì)胞術(shù)的方法檢測(cè)大鼠外周血中性粒細(xì)胞的鞘氨醇激酶1的信使RNA和蛋白表達(dá)。兩兩比較采用獨(dú)立樣本的T檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1.24h生存指數(shù):正常組和假手術(shù)組24h生存率差異不大(P＞0.05)，胰腺炎組與假手術(shù)組相比，生存率明顯降低(P＜0.05)，鞘氨醇激酶1抑制組與胰腺炎12h組相比，生存率明顯升高(P＜0.05);
　　2.血清淀粉酶和血清脂肪酶檢測(cè):正常組和假手術(shù)組血清淀粉酶和血清脂肪酶水平差異不大(P＞0.

4、05)，胰腺炎組與假手術(shù)組相比，血清淀粉酶和血清脂肪酶水平明顯升高(P＜0.05)，鞘氨醇激酶1抑制組與胰腺炎組相比，血清淀粉酶和血清脂肪酶水平明顯降低(P＜0.05);
　　3.肺組織髓過(guò)氧化物酶測(cè)定、肺泡灌洗液蛋白含量測(cè)定:正常組和假手術(shù)組肺組織髓過(guò)氧化物酶活性、肺泡灌洗液蛋白含量差異不大(P＞0.05)，胰腺炎組與假手術(shù)組相比，肺組織髓過(guò)氧化物酶活性、肺泡灌洗液蛋白含量明顯升高(P＜0.05)，鞘氨醇激酶1抑制組與胰腺炎組相

5、比，肺組織髓過(guò)氧化物酶活性、肺泡灌洗液蛋白含量明顯降低(P＜0.05);
　　4.鞘氨醇激酶1活性測(cè)定:正常組和假手術(shù)組鞘氨醇激酶1活性差異不大(P＞0.05)，胰腺炎組與假手術(shù)組相比，Sphk1活性明顯升高(P＜0.05)，鞘氨醇激酶1抑制組與胰腺炎組相比，鞘氨醇激酶1活性明顯降低(P＜0.05);
　　5.胰腺組織和肺組織病理組織學(xué)檢查:正常組和假手術(shù)組胰腺組織和肺組織病理學(xué)形態(tài)差異不大，胰腺炎組與假手術(shù)組相比，胰腺組織

6、和肺組織胰腺組織和肺組織病理學(xué)形態(tài)明顯較重，鞘氨醇激酶1抑制組與胰腺炎組相比，胰腺組織和肺組織病理學(xué)病變明顯交清較輕(P＜0.05);
　　6大鼠血清TNF-α和IL-1β的水平:正常組和假手術(shù)組血清TNF-α和IL-1β的水平差異不大(P＞0.05)，胰腺炎組與假手術(shù)組相比，胰腺炎組血清TNF-α和IL-1β的水平明顯升高(P＜0.05)，鞘氨醇激酶1抑制組與胰腺炎組相比，血清TNF-α和IL-1β的水平明顯降低(P＜0.05)

7、;
　　7.大鼠外周血中性粒細(xì)胞中鞘氨醇激酶1信使RNA的表達(dá)水平:正常組和假手術(shù)組鞘氨醇激酶1信使RNA的表達(dá)水平差異不大(P＞0.05)，胰腺炎組與假手術(shù)組相比，胰腺炎組鞘氨醇激酶1信使RNA的表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，鞘氨醇激酶1抑制組與胰腺炎組相比，鞘氨醇激酶1信使RNA的表達(dá)明顯降低(P＜0.05);
　　8.流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)大鼠外周血中性粒細(xì)胞中鞘氨醇激酶1蛋白表達(dá)水平:正常組和假手術(shù)組鞘氨醇激酶1的蛋白表達(dá)水

8、平差異不大(P＞0.05)，胰腺炎組與假手術(shù)組相比，胰腺炎組鞘氨醇激酶1的蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，鞘氨醇激酶1抑制組與胰腺炎組相比，鞘氨醇激酶1蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.05);
　　結(jié)論:1.急性胰腺炎大鼠中，外周血中性粒細(xì)胞的鞘氨醇激酶1的活性、信使RNA表達(dá)、蛋白表達(dá)與血清淀粉酶和血清脂肪酶水平，左肺組織髓過(guò)氧化物酶活性，肺泡灌洗液蛋白含量，肺組織和胰腺組織的組織病理學(xué)檢查，表現(xiàn)了相同的變化趨勢(shì)，說(shuō)明急性重癥胰腺炎

9、肺損傷中，鞘氨醇激酶1可能與急性胰腺炎肺損傷的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān);
　　2.血清炎性因子TNF-α和IL-1β水平與鞘氨醇激酶1的活性、mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)、血清淀粉酶和血清脂肪酶水平，左肺組織髓過(guò)氧化物酶活性，肺泡灌洗液蛋白含量，肺組織和胰腺組織的組織病理學(xué)檢查呈現(xiàn)了相同的表達(dá)趨勢(shì)，說(shuō)明鞘氨醇激酶1可能是通過(guò)炎性因子的途徑參與急性胰腺炎導(dǎo)致的肺損傷的病理生理過(guò)程的。
　　3.鞘氨醇激酶1抑制組的外周血中性粒細(xì)胞的鞘氨醇激酶