EF24對重癥急性胰腺炎大鼠腸道損傷的影響.pdf

1、重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是多種原因引起胰酶激活導致胰腺組織水腫、壞死和出血，以致全身臟器功能衰竭的炎癥性疾病。雖然內鏡括約肌切開術治療膽結石患者，選擇性腸道凈化和預防性抗生素的使用可能對治療胰腺炎是有益的，但是一直沒有特效的治療藥物。腸道屏障功能在 SAP的恢復中發(fā)揮著重要的作用，所以研究影響腸道屏障的因素，減少SAP的腸道損傷，有助于SAP的治療。近年來姜黃素對SAP的作用越來越受到

2、大家的關注。
　　姜黃素是多酚類化合物，具有抗氧化性、抗炎癥反應、抗病毒、抗腫瘤等作用。姜黃素可以引起生長因子、蛋白激酶及轉錄因子表達的變化。聯苯二氟酮EF24是姜黃素的類似物，目前研究EF24主要圍繞在促進腫瘤細胞凋亡及發(fā)現治療腫瘤的方法上，尚無EF24與急性胰腺炎及腸粘膜屏障方面的研究報道。Vivek R.Yadav等證明EF24能抑制失血性休克時的炎癥反應，因而本研究從抗炎癥反應的角度分析姜黃素類似物EF24對急性胰腺炎腸粘

3、膜屏障的作用。
　　目的：本實驗旨在通過觀察SAP時胰腺、腸道組織學的變化，檢測腸道組織p65、Claudin-1蛋白和mRNA的表達情況和血清IL-6、TNF-α的濃度，探索聯苯二氟酮EF24對胰腺炎腸道損傷的作用及機制，為治療SAP腸道損傷提供新的思路。
　　方法：
　　1.將60只SD大鼠隨機分成空白對照組（CON）、重癥急性胰腺炎組（SAP）和聯苯二氟酮EF24組（EF24），每組再分為6h、12h2個亞組，每

4、組各10只大鼠。
　　2.SAP組、EF24組大鼠給予腹腔內注射20％L-精氨酸3.0g/kg，間隔1h后，注射同等劑量的L-精氨酸；CON組大鼠給予腹腔內注射與L-精氨酸同等劑量的0.9%NaCl，間隔1h后，再次注射同等劑量的NaCl；造模成功后1h，SAP組大鼠給予腹腔內注射聯苯二氟酮 EF24（0.4mg/kg）；Con組、EF24組大鼠給予腹腔內注射同等劑量的聚乙二醇400（聚乙二醇：0.9%NaCl=1:1）。

5、　　3.分別于造模后6h、12h留取胰腺組織、腸道組織和血液，檢測血清內IL-6、TNF-α水平，留取組織標本，通過HE染色觀察腸道、胰腺的組織學變化，采用RT-PCR、Western-blot的方法觀察比較三組腸道p65、Claudin-1蛋白及mRNA的表達差異。
　　4.所有數據采用(x±S)表示，應用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學數據處理。設α=0.05，P<0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：

6、　　1.HE染色結果示：SAP組腸道和胰腺組織病理損傷程度隨時間的延長逐漸加重；EF24組比SAP組各時間點腸道與胰腺組織病變程度有所減輕。
　　2.血清TNF-α的水平： SAP組與CON組各時間點比較，大鼠血清TNF-α濃度顯著升高（P＜0.01）；EF24組與CON組各時間點比較，大鼠血清TNF-α水平明顯升高（P＜0.05）；EF24組與SAP組相比明顯下降（P＜0.05）；各組兩個亞組之間相比，CON組、EF24組6h、

7、12h兩個亞組無顯著差異（P＞0.05）,只有SAP組12h組顯著高于6h組，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　3.血清IL-6水平：SAP組與CON組各時間點比較，大鼠血清IL-6水平顯著升高（P＜0.01）；EF24組與CON組各時間點比較，大鼠血清IL-6濃度明顯升高（P＜0.05）；EF24組與SAP組相比顯著下降（P＜0.05）；各組兩個亞組之間相比，三組6h、12h兩個時間點之間均無顯著差異（P＞0.05）。

8、>　　4.腸道組織Claudin-1 mRNA表達情況：SAP組腸道組織Claudin-1 mRNA的量較CON組明顯減少，具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；EF24組與CON組各時間點比較，腸道組織Claudin-1 mRNA表達量顯著減少（P＜0.05）；EF24組與SAP組比較Claudin-1 mRNA的量明顯上升，有顯著的統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；CON組、EF24組Claudin-1 mRNA量6h、12h時間點相比無顯

9、著差異（P＞0.05），SAP組兩個時間點相比，6h mRNA的量明顯高于12h，且有顯著差異（P＜0.01）。
　　5.腸道組織p65 mRNA表達情況：SAP組和EF24組p65 mRNA的量較CON組均上升（分別P＜0.01；P＜0.05）；EF24組與SAP組相比p65 mRNA的量明顯下降，有顯著差異（P＜0.05）；CON組、EF24組p65 mRNA量6h、12h時間點相比無顯著差異（P＞0.05），SAP組6h、1

10、2h時間點相比，12h mRNA的量明顯高于6h，且有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　6.腸道組織Claudin-1蛋白表達情況：SAP組與CON組各時間點Claudin-1蛋白量相比均顯著降低(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義；EF24組與CON組比較Claudin-1蛋白量明顯下降，有顯著統(tǒng)計學差異（P<0.05）；EF24組與SAP組相比顯著上升（P<0.05）；SAP組兩個亞組相比，6h蛋白的量明顯高于12h，且有統(tǒng)

11、計學差異（P＜0.01）。
　　7.腸道組織p65蛋白表達情況：SAP組與CON組各時間點p65蛋白量相比均顯著升高(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義；EF24組與CON組比較p65蛋白量明顯升高，有顯著統(tǒng)計學差異（P<0.05）；EF24組與SAP組相比顯著下降（P<0.05）；SAP組兩個亞組相比，12h蛋白的量明顯高于6h，且有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；EF24組6h、12h組比較，6h蛋白的量高于12h(P<0.05），