黃芩甙對(duì)重癥急性胰腺炎保護(hù)作用的研究.pdf

1、背景：
　　急性胰腺炎(AcutePancreatitis,AP)是臨床常見急腹癥之一，臨床表現(xiàn)多變，以突發(fā)腹痛及血清淀粉酶(Amylase,AMY)升高為其主要臨床特征。輕癥急性胰腺炎(MildAcutePancreatitis,MAP)患者，經(jīng)過(guò)禁食及補(bǔ)液等處理后可在5～7天內(nèi)完全治愈，病死率極低；而>20％的患者為重癥急性胰腺炎(SevereAcutePancreatitis,SAP)[1,2]。SAP病情復(fù)雜，進(jìn)展迅速，病

2、死率高達(dá)30％-50％[2,18-20]。近年來(lái)，隨著人們生活習(xí)慣改變，膽道疾病的增多，大量飲酒，暴飲暴食，SAP發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。但因其病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明，臨床上尚缺乏特異性治療藥物。因此有關(guān)SAP的發(fā)病機(jī)制及治療措施的研究仍為目前國(guó)內(nèi)外熱點(diǎn)。研究表明SAP時(shí)大量生成的炎癥介質(zhì)相互影響形成級(jí)聯(lián)瀑布式炎癥反應(yīng)，逐漸增大的炎癥反應(yīng)誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(SystemInflammatoryResponseSyndrom

3、e,SIRS)，最終導(dǎo)致多器官功能受損；而多器官功能衰竭(MultipleOrgenFailure,MOF)是SAP患者死亡的主要原因?？梢娧装Y介質(zhì)在SAP發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。同時(shí)氧化應(yīng)激在SAP胰腺組織損傷及伴隨的全身炎癥反應(yīng)中的作用亦不容忽視。氧化應(yīng)激時(shí)產(chǎn)生的大量氧自由基可以通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白硝基化及DNA損傷等多種途徑引起組織細(xì)胞損傷，并引發(fā)炎癥反應(yīng)。故如能有效抑制SAP時(shí)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，就能遏制SAP的進(jìn)展，改善S

4、AP的預(yù)后。柴芩承氣湯和清胰湯是中軍治療SAP的兩味主要湯藥，其臨床療效已得到證實(shí)。黃芩是其主要的有效成分之一。黃芩甙是從黃芩的根中提取的一種黃酮類復(fù)合物，具有抗炎、抗氧化、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、抑制血小板凝集、促凋亡以及調(diào)節(jié)免疫等作用。研究表明黃芩甙可通過(guò)多種途徑保護(hù)SAP時(shí)胰腺組織和周圍及遠(yuǎn)隔臟器，但其保護(hù)作用的具體機(jī)制仍未闡明。
　　目的：
　　通過(guò)3.5％牛磺膽酸鈉逆行胰膽管注射制備SAP大鼠模型，觀察氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)等

5、相關(guān)指標(biāo)在SAP發(fā)病過(guò)程中的變化，評(píng)估氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)在SAP發(fā)病中的作用；給予5％黃芩甙干預(yù)，觀察其對(duì)氧化應(yīng)激損傷、炎癥反應(yīng)的影響及SAP的轉(zhuǎn)歸，明確黃芩甙對(duì)SAP保護(hù)作用，并進(jìn)一步探討黃芩甙對(duì)SAP保護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法：
　　45只雄性SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組及黃芩甙干預(yù)組，每組15只；各組再隨機(jī)分成3h，6h，12h亞組，各亞組5只。假手術(shù)組開腹后僅翻動(dòng)胰腺、十二指腸后關(guān)腹。其余兩組給予3.5％?；悄懰?/p>

6、鈉逆行胰膽管注射制備SAP大鼠模型。黃芩甙干預(yù)組造模成功后10min經(jīng)股靜脈首次推注5％黃芩甙10mg/100g，之后持續(xù)靜脈給予5％黃芩甙10mg/h/100g；其余兩組以相同方法給予等劑量的生理鹽水。分級(jí)與3h，6h，12h后觀察胰腺組織HE染色及病理評(píng)分、血清AMY水平、血清脂肪酶(Lipase,LPS)水平，胰腺組織中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、腫瘤壞死因子-α(TumorNecrosisFactor-α,

7、TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)含量，超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)、髓過(guò)氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活力以及胰腺組織聚腺苷二磷酸核糖(PolyADP-ribose,PAR)，硝基酪氨酸，細(xì)胞時(shí)粘附因子-1(IntercelluarAdhesionMolecule-1,ICAM-1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TransformingGrowthFactor

8、-β,TGF-β)的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)模型組各時(shí)時(shí)點(diǎn)胰腺組織病理評(píng)分較假手術(shù)組顯著升高(p<0.01)。模型組各時(shí)時(shí)點(diǎn)血清AMY，LPS水平，胰腺組織MDA，TNF-α，IL-6含量及MPO活力較假手術(shù)組均顯著增加(p<0.01)，SOD活力顯著下降(p<0.01)。6h模型組大鼠胰腺組織硝基酪氨酸、PAR，ICAM-1以及TGF-β免疫組化染色均呈現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，而假手術(shù)組染色陰性。
　　(2)給予黃芩甙干預(yù)

9、后，胰腺組織病理評(píng)分較模型組顯著降低(p<0.01)，各時(shí)時(shí)點(diǎn)血清AMY，LPS含量較模型組顯著下降(p<0.01)。
　　(3)與模型組相比，各時(shí)時(shí)點(diǎn)黃芩甙干預(yù)組胰腺組織中MDA含量呈顯著下降趨勢(shì)(p<0.01)，SOD活力呈明顯上升趨勢(shì)(p<0.05)；6h黃芩甙干預(yù)組胰腺組織中硝基酪氨酸及PAR（可代表PARP的活性）免疫組化染色陽(yáng)性顆粒較6h模型組明顯減少。
　　(4)與模型組相比，各時(shí)時(shí)點(diǎn)黃芩甙干預(yù)組胰腺組織中TN

10、F-α，IL-6含量及MPO活力呈顯著下降趨勢(shì)(p<0.05)；6h黃芩甙干預(yù)組ICAM-1及TGF-β免疫組化染色陽(yáng)性顆粒較6h模型組明顯減少。
　　結(jié)論：
　　本課題通過(guò)成功建立?；悄懰徕c誘導(dǎo)的SAP大鼠模型，用5％黃芩甙對(duì)SAP進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示黃芩甙能夠通過(guò)有效抑制脂質(zhì)過(guò)氧化損傷、減少硝基酪氨酸的生成、抑制PARP活化、穩(wěn)定SOD抗氧化活性、從而維持機(jī)體氧化—抗氧化平衡；并能減少TNF-α，IL-6的合成，抑制MPO