肝X受體通過線粒體通路調控高糖誘導的H9C2細胞凋亡.pdf

1、目的:
　　1、觀察高糖環(huán)境中H9C2細胞活性及凋亡的改變。
　　2、探討肝X受體通過線粒體途徑在調控H9C2細胞凋亡過程中的作用。
　　方法:
　　1.以H9C2細胞為研究對象,分為低糖組(Control組)、甘露醇組、高糖組、高糖+T0901317組及高糖+5CPPSS-50組。
　　2.CCK-8法檢測各組H9C2細胞的活性;DCFH-DA法分別檢測各組細胞內活性氧水平;羅丹明123熒光染色觀察各組細

2、胞線粒體膜電位變化;qRT-PCR法分別檢測Bax、Bcl-2 mRNA的表達;Western blot檢測Cleaved Caspase3蛋白的表達;Annexin V-FITC法分別檢測各組細胞凋亡率。
　　結果:
　　1.CCK-8檢測各組H9C2細胞活性結果:與Control相比,高糖組、T0901317組、5CPPSS-50組細胞活性均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);而甘露醇組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05

3、)。與高糖組相比,高糖+T0901317組細胞活性增高,高糖+5CPPSS-50組細胞活性降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.DCFH-DA法檢測各組細胞內活性氧水平結果:與Control組相比高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組活性氧水平均升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),甘露醇組差異無明顯統(tǒng)計學意義(P>0.05);與高糖組相比,高糖+T0901317組活性氧水平降低,差異有統(tǒng)計學意

4、義(P<0.05),高糖+5CPPSS-50組活性氧水平升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.羅丹明123熒光染色觀察線粒體膜電位結果:與Control組相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組熒光強度均降低,甘露醇組無明顯差異;與高糖組相比,高糖+T0901317組熒光強度升高,高糖+5CPPSS-50組熒光強度減弱。
　　4.qRT-PCR檢測Bax、Bcl-2 mRNA表達結果:與

5、Control組相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組Bax mRNA的表達均上調,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),甘露醇組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。但與高糖組相比高糖+T0901317組的表達顯著下調,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);高糖+5CPPSS-50組表達上調,差異有統(tǒng)計學意義( P<0.01)。與Control相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組Bcl-2

6、 mRNA的表達均明顯下調,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),甘露醇組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。同時與高糖組相比,高糖+T0901317組表達水平上調,差異有統(tǒng)計學意義( P<0.01),而高糖+5CPPSS-50組表達水平下調,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　5.Western blot檢測Cleaved Caspase3蛋白的表達結果:與Control組相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS

7、-50組蛋白表達水平上調,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),甘露醇組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);而與高糖組相比,高糖+T0901317組蛋白表達水平下調,差異有統(tǒng)計學意義( P<0.01),高糖+5CPPSS-50組蛋白表達水平上調,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　6.Annexin V-FITC法檢測各組細胞凋亡率結果:與Control組相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組凋亡率均上升

8、,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),甘露醇組凋亡率無明顯改變,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與高糖組相比,高糖+T0901317組凋亡率降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),高糖+5CPPSS-50組凋亡率上升,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論:
　　1.LXRs激動劑T0901317可改善高糖環(huán)境中H9C2細胞活性,抑制細胞凋亡,對細胞起到一定的保護作用;抑制LXRs后,對高糖環(huán)境中H9C2細胞損傷作用更