Fractalkine誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞凋亡及黃芪甲苷的干預(yù)作用.pdf

1、目的:探討可溶性Fractalkine對于H9C2心肌細(xì)胞的增殖的影響;進(jìn)一步探討可溶性Fractalkine對H9C2心肌細(xì)胞凋亡的影響及黃芪甲苷的干預(yù)作用。
　　方法:首先分別選用0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml的可溶性Fractalkine刺激H9C2心肌細(xì)胞，分別于0、12、24、36、48小時(shí)采用MTT法檢測可溶性Fractalkine對心肌細(xì)胞增殖的

2、作用;計(jì)算出可溶性Fractalkine作用的最佳時(shí)間及最佳作用劑量;然后分別采用0ng/ml（A組）、200ng/ml（B組）、200ng/ml可溶性Fractalkine+50mg/L黃芪甲苷（C組）刺激H9C2心肌細(xì)胞，通過熒光染色檢測細(xì)胞的凋亡情況;并進(jìn)一步應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡百分?jǐn)?shù)，通過蛋白免疫印跡(western blotting)及實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-qPCR)測定可溶性Fractalkine對H9C2心肌

3、細(xì)胞凋亡的影響。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，采用非配對t檢驗(yàn)或單因素方差分析，按P＜0.05的檢驗(yàn)水準(zhǔn)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1.低劑量的可溶性的Fractalkine就能夠抑制H9C2心肌細(xì)胞的增殖;而且此抑制作用隨著可溶性Fractalkine濃度的增加及作用時(shí)間的延長而增加，各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;得出最佳作用時(shí)間為24小時(shí)，半數(shù)抑制劑量為277.5ng/ml;2.通過熒光染色發(fā)現(xiàn)可溶性Fractalkin

4、e可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡;應(yīng)用黃芪甲苷后可見凋亡細(xì)胞減少;3.Annexin-FITC檢測細(xì)胞凋亡率，顯示A組、B組、C組凋亡率分別為4.13±0.07％，41.64±0.75％，34.07±0.55％;提示可溶性Fractalkine可誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞凋亡(P＜0.001)，而黃芪甲苷可以抑制這種作用(P＜0.01);4.Western blotting結(jié)果顯示，B組Bcl-2的表達(dá)減少，Bax的表達(dá)增加(P＜0.05)，應(yīng)用黃芪甲苷

5、后可抑制這種作用（P＜0.05）;5.RT-qPCR結(jié)果顯示:B組Bcl-2 mRNA的表達(dá)量明顯減少，而Bax mRNA的表達(dá)量明顯增加(P＜0.001)，應(yīng)用黃芪甲苷后可抑制這種作用（P＜0.01）。
　　結(jié)論:1.可溶性Fractalkine可抑制H9C2心肌細(xì)胞增殖，此作用隨著可溶性Fractalkine濃度的增加及作用時(shí)間的延長而增大;2.可溶性Fractalkine可誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡;3.黃芪甲苷可減少可溶