抵抗素通過AMPK-FOXO3a通路介導(dǎo)自噬誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞肥大.pdf

1、目的：探究抵抗素導(dǎo)致H9c2心肌細(xì)胞肥大是通過調(diào)控AMPK/FOXO3a信號通路和自噬活動(dòng)及其可能的分子機(jī)制。
　　方法：培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞，待生長活力良好時(shí)，用含胎牛血清濃度為0.1％的培養(yǎng)基對細(xì)胞進(jìn)行饑餓24h。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃閮纱蟛糠郑旱谝徊糠謱⒓?xì)胞分為4組，分別是Con組：對照組；Res組：抵抗素50 ng/mL組；（Res+Met）組：抵抗素50 ng/mL加二甲雙胍2 mmol/L組；Met組：二甲雙胍2 mmol/

2、L組。第二部分同樣將H9c2心肌細(xì)胞分為4組，依次是Con組：對照組；Res組：抵抗素50 ng/mL組；（Res+Rap）組：抵抗素50 ng/mL加雷帕霉素100nmol/L組；Rap組：雷帕霉素100nmol/L組。用Image J分析細(xì)胞表面積；BCA法測定單細(xì)胞蛋白含量；實(shí)時(shí)熒光PCR（RT-qPCR）檢測心肌肥大相關(guān)胚胎基因BNF、β-MHC的表達(dá)量；Western Blot檢測p-FOXO3a、p-AMPK、p-mTOR、

3、FOXO3a、AMPK、mTOR等通路蛋白表達(dá)及自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3表達(dá)量。
　　結(jié)果：⑴抵抗素能明顯增大H9c2心肌細(xì)胞表面積（4147±141.7比7554±265.2，P＜0.0001），增加細(xì)胞內(nèi)蛋白含量（330.6±23.68比438.1±22.55，P＜0.05），并促使心肌細(xì)胞內(nèi)胚胎基因BNF、β-MHC表達(dá)上調(diào)（P<0.01），AMPK激動(dòng)劑二甲雙胍能抑制上述變化（P<0.05）。⑵經(jīng)抵抗素處理的心肌

4、細(xì)胞，與Con組相比p-AMPK表達(dá)量顯著降低（P<0.01），pFOXO3a、p-mTOR信號分子表達(dá)量明顯升高（P<0.01）；用二甲雙胍干預(yù)后再加入抵抗素，p-AMPK較Res組明顯升高（P<0.05），而pFOXO3a、p-mTOR表達(dá)量較Res組明顯降低（P<0.05）。⑶抵抗素處理心肌細(xì)胞后，與Con組對比Beclin1、LC3表達(dá)量顯著降低（P<0.01），用雷帕霉素干預(yù)后再加入抵抗素，Beclin1、LC3表達(dá)量較Res