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文檔簡介
1、目的:
探討抵抗素通過調(diào)控LKB1/AMPK信號通路對H9c2心肌細(xì)胞肥大的影響及其可能的分子機(jī)制。
方法:
生長狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞,使用含0.1%胎牛血清的DMED高糖培養(yǎng)基饑餓24 h后進(jìn)行不同干預(yù)。實驗分為4組,Con組:對照組;R50組:抵抗素50 ng/mL組;(R50+Me2)組:抵抗素50 ng/mL加二甲雙胍2 mmol/L組;Me2組:二甲雙胍2 mmol/L組。各組分別使用相應(yīng)誘
2、導(dǎo)劑處理48 h后進(jìn)行檢測,顯微鏡鏡照相系統(tǒng)拍照后使用Image J軟件分析細(xì)胞表面積,細(xì)胞裂解后用BCA法測單細(xì)胞蛋白含量,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率,實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測BNF、β-MHC的相對表達(dá)量。確定心肌細(xì)胞肥大模型建立成功之后,用50 ng/mL抵抗素以30 min,1 h,2 h,4 h,8 h,24 h等不同的時間間隔處理細(xì)胞,用Western blot分析p-AMPK、p-LKB1的表達(dá),確
3、定信號蛋白磷酸化水平與時間關(guān)系。最后分四組,Con為對照組,R50組和Me2組分別處理2 h,(R50+Me2)組先用二甲雙胍預(yù)處理1 h后再抵抗素處理1 h;分別用Western blot分析p-AMPK、AMPK、p-LKB1、LKB1的表達(dá)量。
結(jié)果:
抵抗素能顯著增加H9c2心肌細(xì)胞表面積、促進(jìn)蛋白合成量和細(xì)胞凋亡,改變細(xì)胞周期,并上調(diào)心肌細(xì)胞胚胎基因BNF、β-MHC的表達(dá),而二甲雙胍能明顯逆轉(zhuǎn)以上現(xiàn)象。抵
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