SD118-2對人HepG2細胞增殖、細胞凋亡、細胞周期影響及其作用機制.pdf

1、研究背景：
　　 肝細胞癌(HCC)，是全球癌癥死亡的主要腫瘤之一，也是肝硬化患者的主要死因。HCC的發(fā)病率近年來不斷增加，每年有50萬～100萬新增患者[1]。HCC的早期診斷及有效治療對延長肝細胞癌患者生存時間起到重要的作用。肝移植及肝臟外科切除術是目前最常用的治療方法，但是由于肝源的缺少及術后高復發(fā)率致使這些治療方法在臨床上沒有取得顯著療效，也增加了患者的痛苦及經(jīng)濟負擔?；熓悄壳皩τ诓贿m應外科手術病人的輔助治療方法之一，

2、然而化療的臨床治療效果不是很顯著。例如，阿柔比星是臨床治療肝癌的標準藥物，對身體具有很大的副作用，在延長生存時間方面也沒有顯著的療效[2]。近半個世紀以來，人們一直致力于自天然植物中提取藥物用于臨床癌癥的治療，并證實其臨床效果較顯著。
　　 化合物SD118粗提自中國南海深海處藻類等沉積物中，其經(jīng)過提純后分為15種成分，成分Ⅰ(青黃霉素X)即為SD118－2。研究證實SD118－2對人MCF－7、HepG2、NCI－H460、H

3、eLa等細胞的活性具有抑制作用，其中對人HepG2細胞的細胞毒性更顯著[3]。
　　 研究目的：
　　 觀察化合物SD118－2對人HepG2細胞增殖、細胞凋亡及細胞周期的影響。研究化合物SD118－2誘導細胞凋亡的作用機制。
　　 研究方法：
　　 取對數(shù)生長期人HepG2細胞，分為實驗組和對照組。實驗組給予7μg/mLSD118-2作用于人HepG2細胞，對照組給予0.7％DMSO處理。化合物SD11

4、8-2的IC50是7μg/mL。
　　 1、采用MTT法檢測SD118-2對正常人肝臟細胞、人HepG2細胞增殖影響：7μg/mL化合物SD118-2分別作用于人正常肝臟細胞、人HepG2細胞48h后通過酶標儀570nm波長測每孔的吸光度值。
　　 細胞增殖率=(實驗組吸光度均值)/(對照組吸光度均值)×100％。
　　 2、采用DAPI熒光染色法觀察化合物SD118-2處理后細胞形態(tài)的變化：7μg/mLSD11

5、8-2分別作用于人HepG2細胞12h、24h、48h后DAPI染色，通過熒光顯微鏡激發(fā)觀察人HepG2細胞不同時間段形態(tài)變化。
　　 3、檢測細胞凋亡率：7μg/mLSD118-2分別作用于人HepG2細胞12h、24h、48h，通過流式細胞儀AnnexinV-FITC/PI雙標法檢測化合物SD118-2誘導人HepG2細胞凋亡率。
　　 4、檢測細胞周期阻滯：7μg/mLSD118-2分別作用于人HepG2細胞12h

6、、24h、48h，通過流式細胞儀檢測化合物SD118-2引起人HepG2細胞周期阻滯。
　　 5、采用JC-1染色法檢測細胞線粒體膜電位(△Ψm)水平：7μg/mLSD118-2分別作用于人HepG2細胞12h、24h、48h，使用JC-1染色，通過流式細胞儀檢測細胞線粒體膜電位的變化。
　　 6、WesternBlot檢測凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax、PARP、C-PARP表達變化：7μg/mLSD118-2分別作用

7、于人HepG2細胞12h、24h、48h，收集細胞、提取蛋白，通過WesternBlot檢測化合物作用于人HepG2細胞后凋亡相關蛋白的變化。
　　 研究結果：
　　 化合物SD118-2呈時間依賴性改變?nèi)薍epG2細胞形態(tài)、抑制細胞的生長、降低細胞線粒體膜電位、誘導細胞凋亡、細胞G2期阻滯；抗凋亡蛋白Bcl-2表達呈時間依賴性減少，促凋亡蛋白Bax、C-PARP表達呈時間依賴性增加；化合物SD118-2對正常肝細胞增殖