抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響.pdf

1、目的:免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是機體免疫系統(tǒng)中非常重要的免疫分子,其功能主要是介導體液免疫,傳統(tǒng)的免疫學理論認為,Ig是B淋巴細胞特有產(chǎn)物,機體其它細胞不產(chǎn)生Ig。然而,近年來人們發(fā)現(xiàn)Ig異位表達于多種上皮源性的惡性腫瘤組織和細胞系,初步研究表明異位表達的Ig具有生長因子樣作用。我們研究小組已對IgM在多種上皮來源腫瘤組織和細胞系中的表達進行了報道,本實驗旨在探討喉鱗癌Hep-2細胞中IgM蛋白的表達情況,并對喉

2、鱗癌Hep-2細胞表達IgM蛋白的生物學活性進行初步研究。
　　 方法:進行喉鱗癌Hep-2細胞體外培養(yǎng),分別通過免疫細胞化學技術(鏈霉親和素生物素法,SABC法)、免疫印記法(Western blot)以及流式細胞術(FCM)檢測Hep-2細胞中IgM蛋白的表達情況；應用抗人IgM抗體,設置時間梯度和濃度梯度,通過細胞增殖抑制試驗(MTS法)研究抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞生長增殖活性的影響,并對細胞形態(tài)進行觀察；通過

3、軟瓊脂細胞集落形成實驗檢測不同濃度抗人IgM抗體對Hep-2細胞增殖能力的影響；通過流式細胞儀(Annexin V／PI染色)和Hoechst染色方法,研究抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞凋亡的影響,并觀察凋亡細胞形態(tài)；應用流式細胞儀PI染色法觀察抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞細胞周期的影響。
　　 結(jié)果:免疫細胞化學SABC法顯示Hep-2細胞存在IgM蛋白表達且主要表達于細胞漿中；將Hep-2細胞的蛋白提取液進行免

4、疫印記法檢測,在分子量75KD處檢出了陽性信號,提示Hep-2細胞存在IgM蛋白的表達；應用流式細胞儀間接免疫熒光法檢測出Hep-2細胞的熒光強度為12.4±2.55,陽性對照組Raji細胞熒光強度為17.2±2.30,分別與陰性對照組熒光強度2.29±0.50比較差異顯著(P<0.05),說明IgM在喉鱗癌Hep-2細胞中有表達；MTS顯示喉鱗癌Hep-2細胞的抑制率隨時間延長而增高,在第三天開始出現(xiàn)明顯抑制作用,同時喉鱗癌Hep-2

5、細胞的抑制率隨濃度增加而增高,在50μg／ml濃度開始出現(xiàn)明顯抑制作用,說明抗人IgM抗體具有時間和濃度依賴性地抑制喉鱗癌Hep-2細胞增殖生長的作用(P<0.05),并使細胞出現(xiàn)相應形態(tài)學改變；軟瓊脂細胞集落形成實驗顯示抗人IgM抗體能明顯抑制喉鱗癌Hep-2細胞的增殖能力,并具有濃度依賴性,與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)；抗人IgM抗體能明顯促進喉鱗癌Hep-2細胞凋亡,且使喉鱗癌hep-2細胞呈現(xiàn)出典型凋亡形態(tài)改變,流式

6、細胞儀Annexin V／PI染色和hoechst染色方法檢測Hep-2細胞凋亡率分別為(20.33±1.93)％和(20.45±3.45)％,與對照組比較差異顯著(均P<0.05)；流式細胞術顯示抗人IgM抗體還能影響喉鱗癌Hep-2細胞的細胞周期,導致G1期細胞減少,S期細胞增多,從而使細胞周期阻滯于S期(P<0.05)。
　　 結(jié)論:喉鱗癌Hep-2細胞能夠表達IgM蛋白,且主要表達于Hep-2細胞漿中,抗人IgM抗體能夠