抗人IgM抗體對(duì)喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤血管生成的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:喉癌是來(lái)源于喉粘膜上皮組織的惡性腫瘤,最常見(jiàn)的為喉鱗狀細(xì)胞癌,約占全身惡性腫瘤的5.7％-7.6％,近年來(lái)其發(fā)病率逐漸增多。目前喉癌的治療方式仍以手術(shù)為主,輔以放、化療,雖然近年來(lái)原有的治療方法不斷改善,但是喉癌的治療效果仍不理想,但其5年生存率并未明顯提高。隨著各種生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,人們正積極尋找新治療方式和新的藥物來(lái)治療喉癌。近年來(lái)許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)一些上皮來(lái)源的惡性腫瘤中存在免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)的表達(dá)

2、,這一現(xiàn)象已成為腫瘤免疫研究的一個(gè)熱點(diǎn),并且可能為腫瘤的治療提供一個(gè)新的方向。腫瘤血管生成與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。而促血管生成因子的表達(dá)則是腫瘤血管生成的重要因素。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究抗人IgM抗體對(duì)喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤微血管密度(microvessel density, MVD)以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、CD40蛋白表達(dá)的影響,以探討抗人IgM抗體抗腫瘤

3、血管生成的作用和可能的機(jī)制,從而為抗人IgM抗體應(yīng)用于喉鱗癌的治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:在本實(shí)驗(yàn)小組的前期研究[補(bǔ)充劉蓓學(xué)位論文作為參考文獻(xiàn)]中我們已經(jīng)成功建立了喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,將15只裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、IgG對(duì)照組和PBS對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組移植瘤內(nèi)注射抗人IgM抗體,3天注射一次,每次每只注射0.3mg,一共注射五次, IgG組移植瘤內(nèi)注射羊IgG,注射量與注射方法與實(shí)驗(yàn)組相同。PBS組移植瘤內(nèi)注射PBS液,注射

4、量與注射方法與實(shí)驗(yàn)組相同。觀察裸鼠的生長(zhǎng)情況,最后一次用藥后3天,處死裸鼠,取出移植瘤體,應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)各種腫瘤組織中CD31標(biāo)記的微血管密度(MVD)及VEGF、CD40蛋白表達(dá),并采用圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)VEGF及CD40的平均光密度。結(jié)果:(1)3組裸鼠移植瘤組織切片經(jīng)病理檢查證實(shí)為喉鱗癌,并且在實(shí)驗(yàn)期內(nèi),15只裸鼠全部存活,無(wú)一死亡。(2)免疫組織化學(xué)SAP法檢測(cè)裸鼠移植瘤MVD,實(shí)驗(yàn)組MVD為11.33±1.86, Ig

5、G對(duì)照組為15.92±2.17,PBS對(duì)照組為16.50±2.35,實(shí)驗(yàn)組與兩個(gè)對(duì)照組比較MVD顯著下降,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)用免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織中VEGF、CD40蛋白的表達(dá),實(shí)驗(yàn)組 VEGF蛋白表達(dá)的平均光密度值為0.216±0.013,IgG對(duì)照組為0.362±0.015,PBS對(duì)照組為0.377±0.018,實(shí)驗(yàn)組與兩個(gè)對(duì)照組相比VEGF蛋白表達(dá)明顯下降,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)實(shí)驗(yàn)組CD40蛋白表達(dá)的平均光密度值為0.171±0.013, IgG對(duì)照組為0.233±0.013,PBS對(duì)照組為0.237±0.014,實(shí)驗(yàn)組較兩個(gè)對(duì)照組CD40蛋白表達(dá)明顯下降,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(5)各組腫瘤組織中MVD與VEGF、CD40蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論:(1)抗人IgM抗體可以有效抑制人喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤的MVD,即對(duì)移植瘤的血管生成有明顯的抑制作