內皮抑素抑制Namalwa淋巴瘤裸鼠移植瘤腫瘤血管生成的作用及其機制.pdf

1、目的:1.了解內皮抑素對Namalwa淋巴瘤裸鼠移植瘤生長和腫瘤血管生成的抑制作用。2.初步探討內皮抑素減少Namalwa淋巴瘤移植瘤腫瘤血管生成和調節(jié)血管內皮細胞叉頭框蛋白O1表達的關系。
　　方法:1.體內實驗:皮下注射Namalwa淋巴瘤細胞建立裸鼠移植瘤模型。在植瘤后第11天開始分組干預,每天分別于腹腔內注射內皮抑素2.5mg/kg、5mg/kg和10mg/kg;陽性對照組注射環(huán)磷酰胺75mg/kg,每2天1次,共3次;陰

2、性對照組每天注射同容積生理鹽水。每2天測量一次腫瘤的最大垂直徑,按長×寬～2×0.52計算腫瘤體積,比較各組相對腫瘤體積(干預后腫瘤體積/干預前腫瘤體積),并計算相對腫瘤增殖率。任一內皮抑素組出現(xiàn)抑瘤作用時停止干預,處死荷瘤裸鼠,分離腫瘤組織,進行血管內皮細胞CD31免疫組化染色和微血管密度計數(shù)。2.體外實驗:小鼠微血管內皮細胞分別與0μg/ml、20μg/ml和80μg/ml內皮抑素在體外共培養(yǎng)16小時,用transwell小室觀察細

3、胞遷移能力,XTT法測定細胞增殖活性,RT-PCR和westernblot測定細胞叉頭框蛋白O1在mRNA和蛋白水平的表達。3.離體實驗:建立Namalwa淋巴瘤裸鼠移植瘤模型后,分別注射有效劑量的內皮抑素(根據(jù)第一部分研究決定干預方案)和生理鹽水,干預結束分離腫瘤組織,用磁珠分選CD31標記的血管內皮細胞,比較其叉頭框蛋白O1表達水平。
　　結果:1.移植瘤成瘤率100％,各組成瘤時間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.523),干預過程

4、中各組荷瘤裸鼠未發(fā)生死亡。2.干預6天后,各組相對腫瘤體積差異無統(tǒng)計學意義(P=0.185);干預8天后,環(huán)磷酰胺組相對腫瘤體積小于生理鹽水組(P=0.003);干預12天后,5mg/kg/d內皮抑素組相對腫瘤體積小于生理鹽水組(P=0.027),腫瘤相對增殖率為64.2%;而2.5mg/kg/d、10mg/kg/d組和生理鹽水組差異無統(tǒng)計學意義,P值分別為0.693和0.604,腫瘤相對增殖率分別為87.4%和85.9%。3.干預12

5、天后,5mg/kg/d內皮抑素組相對腫瘤體積大于環(huán)磷酰胺組(P=0.046),后者腫瘤相對增殖率為38.4%。4.干預12天后,5mg/kg/d內皮抑素組腫瘤組織微血管密度計數(shù)少于生理鹽水對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.006),而2.5mg/kg/d和10mg/kg/d組與生理鹽水組差異無統(tǒng)計學意義,P值分別為0.468和0.220。5.內皮抑素干預16小時后小鼠微血管內皮細胞遷移數(shù)減少,該作用隨內皮抑素作用濃度提高而增加(P=0.

6、000)。相應濃度干預后微血管內皮細胞增殖活性差異無統(tǒng)計學意義(P=0.484)6.與抑制遷移對應,內皮抑素干預16小時后上調小鼠微血管內皮細胞株叉頭框蛋白O1的mRNA和總蛋白表達水平(P<0.05),磷酸化蛋白表達水平無變化(P=0.943),以非磷酸化叉頭框蛋白O1表達上調為主,該作用隨內皮抑素濃度提高而增加。7.移植瘤組織的細胞懸液經(jīng)磁珠陽性分選前后CD31陽性細胞分別為17.2%和90.9%,血管內皮細胞得到純化。8.5mg/

7、kg/d內皮抑素干預12天后的移植瘤組織CD31陽性細胞磷酸化叉頭框蛋白O1表達水平和生理鹽水對照組差異無統(tǒng)計學意義(P=0.896),總叉頭框O1蛋白表達高于生理鹽水對照組(P=0.047),以非磷酸化叉頭框01蛋白表達升高為主;而未和磁珠結合的CD31陰性細胞無該蛋白表達。
　　結論:1.內皮抑素可抑制Namalwa淋巴瘤裸鼠移植瘤生長,即使腫瘤負荷較大,抑瘤作用仍顯著。2.內皮抑素發(fā)揮抑瘤作用需要合適的劑量,過高或過低劑量的