人血管內皮抑制素vasostatin基因抑制裸鼠種植性肝癌血管生成的實驗研究.pdf

1、研究背景和目的
　　 目前研究表明血管生成與腫瘤的生物學行為密切相關。肝癌是富血管性腫瘤，其高血供、高轉移、高復發(fā)的特點提示血管生成在肝癌的惡性生物學行為中扮演著十分重要的角色。研究發(fā)現(xiàn)，人血管內皮抑制素vasostatin基因不僅在多種實體腫瘤細胞表面有高水平的表達，而且在腫瘤組織新生血管內皮細胞有強烈表達。因此，選擇人血管內皮抑制素vasostatin基因或者單克隆抗體來治療腫瘤是近年腫瘤研究的一個熱點。本實驗應用免疫組化技

2、術探討了人血管內皮抑制素vasostatin基因治療裸鼠皮下種植性人肝細胞癌的效果，以及對肝癌血管生成及腫瘤細胞凋亡的影響，為肝癌基因治療提供新的思路和方法。研究方法：
　　 1.構建人血管內皮抑制素vasostatin基因表達載體vasostatin/pcDNA3.1并轉入感受態(tài)細菌，提取質粒酶切鑒定。
　　 2.60只4周齡雄性裸鼠皮下接種人肝癌細胞株HepG2，建立肝癌動物模型。
　　 3.成瘤裸鼠隨機分為

3、2組，每組30只。應用電轉染方法行人血管內皮抑制素vasostatin基因治療，對照組以等量空殼質粒替代。觀察腫瘤生長情況并記錄腫瘤大小，6周后切取腫瘤秤重，計算抑瘤率。
　　 4.應用免疫組化技術分別檢測整合素反義基因治療前后裸鼠種植肝癌組織中vasostatin蛋白的表達及其微血管密度(MVD)。
　　 5.應用TUNEL法檢測治療組與對照組腫瘤細胞凋亡，計算凋亡指數(shù)(AI)并進行組間比較。結果
　　 1.治

4、療組與對照組裸鼠種植瘤的生長情況有明顯差異，對照組、vasostatin基因組的平均瘤重分別是(1.23±0.82)g、(0.81±0.62)g，兩組比較有顯著性差異(p＜0.05)。
　　 2.對照組、vasostatin組的MVD分別是18.26±1.72、5.62±0.59，實驗組與對照組比較差異顯著(p＜0.05)。
　　 3.對照組、vasostatin組的AI分別為6.25±1.32、16.48±0.96，實