雷帕霉素抑制肝癌腫瘤血管生成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、器官移植術(shù)后傳統(tǒng)免疫抑制劑的應(yīng)用可增加腫瘤復(fù)發(fā)或新生腫瘤發(fā)生的機(jī)會(huì)，即使器官移植術(shù)很成功，這也可能是造成患者死亡的重要原因。新型免疫抑制劑雷帕霉素不僅具有肝、腎毒性低，患者耐受性良好等特點(diǎn)，據(jù)最近報(bào)道還具有抑制多種腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的作用，包括結(jié)腸癌、腎癌、胰腺癌、乳腺癌等。研究證實(shí)雷帕霉素抗腫瘤機(jī)制可能與抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡；抑制腫瘤血管生成等有關(guān)，但具體機(jī)制尚不清楚?！澳[瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移具有血管依賴性”這一理論已經(jīng)被廣泛接受

2、，肝癌為富血管腫瘤，抑制腫瘤血管生成可作為控制肝癌增殖、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的重要手段。近年來(lái)國(guó)內(nèi)、外研究證實(shí)，雷帕霉素可以通過(guò)抑制肝癌細(xì)胞增殖，誘發(fā)肝癌細(xì)胞凋亡抑制腫瘤生長(zhǎng)，至于雷帕霉素能否通過(guò)抑制肝癌腫瘤血管生成抑制肝癌生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移國(guó)內(nèi)、外鮮有報(bào)道。 目的:探討雷帕霉素對(duì)肝癌腫瘤血管生成的抑制作用及相關(guān)機(jī)制，同時(shí)檢測(cè)對(duì)肝癌生長(zhǎng)的抑制作用。 方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，隨機(jī)分為雷帕霉素常規(guī)劑量組(1.5 mg/kg

3、/d)、低劑量組(0.15 mg/kg/d)、高劑量組(4.5 mg/kg/d)及對(duì)照組，腹腔注射給藥，對(duì)照組給予相同體積生理鹽水。用藥3周后摘眼球放血法處死動(dòng)物，留取血清標(biāo)本，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)水平：實(shí)驗(yàn)中，每3天記錄皮下種植瘤大小并觀察動(dòng)物一般狀況，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小心剝離皮下腫瘤，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤大小，稱量瘤重及鼠重，標(biāo)本石蠟包埋常規(guī)病理切片，CD34標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞行腫瘤

4、微血管(MVD)記數(shù)；打開(kāi)腹腔及胸腔，仔細(xì)觀察有無(wú)轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)，留取動(dòng)物肝臟及雙肺，通過(guò)大體觀察及病理切片檢測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移情況。體外實(shí)驗(yàn)，原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)，遷移實(shí)驗(yàn)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)雷帕霉素對(duì)VEGF誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、細(xì)胞周期及凋亡的影響。 結(jié)果：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，雷帕霉素常規(guī)劑量組裸鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，腫瘤MVD明顯降低，血清VEGF表達(dá)水平顯著降下降(142.35±53.64 Vs 259.21±8

5、2.68.17.09±2.34 vs 25.77±2.49，66.84±6.90 vs 78.78±3.63)(P<0.05)。與對(duì)照組比較，低劑量組，高劑量組腫瘤體積、MVD及血清VEGF水平雖受到一定程度抑制，但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，以上各組動(dòng)物中均未觀察到肝癌轉(zhuǎn)移病灶。體外實(shí)驗(yàn)中，雷帕霉素抑制了VEGF誘導(dǎo)的HVECs增殖與遷移，流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)HUVECs被扣留在G0/G1期，細(xì)胞凋亡率增加。 結(jié)論:(1)雷帕霉素可通過(guò)