雷帕霉素與紫杉醇對血管成形術(shù)后再狹窄作用的實驗研究.pdf

1、目的： 評價雷帕霉素、紫杉醇等抗增殖藥物對血管成形術(shù)（percutaneous transluminal angioplasty，PTA）后新生內(nèi)膜增生及血管重塑的影響；評價雷帕霉素、紫杉醇對PTA后血管內(nèi)皮化及血管壁凝血相關(guān)因子的影響；比較不同給藥方式下紫杉醇對PTA后新生內(nèi)膜增生及血管壁凝血相關(guān)因子的影響。 材料與方法： 1.建立大鼠頸總動脈損傷模型。 2.采取外膜給藥（以pluonic F-127為

2、藥物釋放載體），測定大鼠頸總動脈損傷后15天、30天新生內(nèi)膜、中膜厚度與面積，分別計算內(nèi)膜與中膜面積比、狹窄率、內(nèi)彈力膜及外彈力膜圍繞面積等指標，與對照組進行比較，觀察并定量分析在抗增殖藥物影響下血管壁大體形態(tài)學變化。 3.采取外膜給藥，以CD31標記血管內(nèi)皮細胞檢測抗增殖藥物對血管內(nèi)皮化的影響；通過免疫組化及原位雜交評估抗增殖藥物對血管壁組織因子（tissue factor，TF）、組織型纖溶酶原激活劑（tissue type

3、 plasminogen activator，t-PA）及纖溶酶原激活物抑制劑1（inhibitors of plasminogen activator-1，PAI-1）表達的影響。 4.采取腔內(nèi)給藥，觀察不同濃度紫杉醇局部瞬時給藥對損傷后新生內(nèi)膜增生、血管內(nèi)皮化的影響及其血栓形成傾向，與外膜給藥進行比較。 結(jié)果： 1.外膜給藥，損傷后15天、30天，雷帕霉素（300μg/100μl組及600μg/100μl組）

4、及紫杉醇（20μg/100μl及40μg/100μl）實驗組新生內(nèi)膜厚度及面積、內(nèi)膜與中膜面積比及狹窄率均低于對照組（P<0.01）；對血管重塑的影響，損傷后30天兩種抗增殖藥物組均出現(xiàn)內(nèi)、外彈力膜圍繞面積的縮小（P<0.05）；兩種抗增殖藥物高低兩種濃度對血管壁的影響無統(tǒng)計學差別。 2.外膜給藥，損傷后15天、30天，雷帕霉素及紫杉醇實驗組不同程度阻礙損傷后血管內(nèi)皮化，內(nèi)膜游離緣不光整并且出現(xiàn)異常增大變形的內(nèi)皮細胞；與對照組相

5、比，雷帕霉素及紫杉醇實驗組新生內(nèi)膜中TF mRNA及TF的表達高于對照組（P<0.05），TF在新生內(nèi)膜具有向心性分布的特點，即主要集中于新生內(nèi)膜游離緣，損傷后30天尤為明顯：與對照組相比，雷帕霉素及紫杉醇實驗組新生內(nèi)膜PAI-1 mRNA及PAI-1的表達高于對照組（P<0.05）；雷帕霉素與紫杉醇實驗組新生內(nèi)膜t-PA蛋白的表達低于對照組（P<0.05）。 3.腔內(nèi)瞬時給藥：血管損傷后15天及30天，紫杉醇高濃度（180μg

6、/30μl）2分鐘、10分鐘組及低濃度（90μg/30μl）10分鐘組新生內(nèi)膜厚度、面積、內(nèi)膜與中膜面積比及狹窄率等均低于對照組（P<0.05）；內(nèi)、外彈力膜圍繞面積測定顯示，實驗組與對照組之間無統(tǒng)計學差異；與對照組相比較，實驗組TF mRNA及TF蛋白在新生內(nèi)膜中的表達與對照組沒有統(tǒng)計學差別（P>0.05）；實驗組對新生內(nèi)膜中PAI-1mRNA的影響與對照組相比沒有統(tǒng)計學差別（P>0.05）；對于PAI-1蛋白在新生內(nèi)膜中的表達，高濃

7、度10分鐘組高于對照組（P<0.05），而其他3組（高濃度2分鐘、低濃度2分鐘及10分鐘組）與對照組相比沒有統(tǒng)計學差別（P>0.05）；對新生內(nèi)膜中t-PA蛋白表達的影響，實驗組除了高濃度2分鐘組低于對照組（P<0.05）以外，其余各組雖然在數(shù)值上低于對照組，但無統(tǒng)計學意義。 結(jié)論： 1.雷帕霉素與紫杉醇外膜給藥緩慢持續(xù)釋放有效的抑制PTA后新生內(nèi)膜增生。 2.雷帕霉素與紫杉醇外膜給藥緩慢持續(xù)釋放具有一定的負性重

8、塑效應(yīng)（本實驗中損傷后30天），此效應(yīng)對于以支架作為釋放載體來說意義不大，但對于非支架釋放載體以及未來新治療方式的研發(fā)具有一定參考意義。 3.雷帕霉素與紫杉醇外膜給藥緩慢持續(xù)釋放在抑制PTA后新生內(nèi)膜增殖的同時阻礙內(nèi)皮化，再生或殘存內(nèi)皮細胞發(fā)生形態(tài)改變。 4.雷帕霉素與紫杉醇外膜給藥緩慢持續(xù)釋放誘導(dǎo)損傷后血管內(nèi)膜TF在mRNA及蛋白水平的表達，并且TF蛋白有沿內(nèi)膜腔面游離緣分布的特點。 5.雷帕霉素與紫杉醇外膜給