雷帕霉素納米粒防治移植靜脈再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:自體靜脈移植為冠心病或周圍血管疾病患者提供了一個(gè)有效的治療方法，但是，自體靜脈移植后再狹窄的發(fā)生率較高。移植靜脈再狹窄的機(jī)制涉及到一系列復(fù)雜的病理生理學(xué)過程，傳統(tǒng)的藥物治療效果不明顯。雷帕霉素被證實(shí)可抑制血管內(nèi)膜增生，雷帕霉素藥物涂層支架在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究中也被證實(shí)可預(yù)防血管再狹窄，但將雷帕霉素制成納米粒劑型，血管腔內(nèi)局部灌注治療移植血管再狹窄的研究未見有報(bào)道。 本研究欲通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)，達(dá)到如下目的： 1

2、.建立可靠的兔移植靜脈再狹窄模型，應(yīng)用彩色多普勒超聲和組織病理學(xué)檢查判斷移植靜脈狹窄的程度并評(píng)價(jià)兩者的相關(guān)性，尋求一種操作簡(jiǎn)單、結(jié)果精確可用于在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中判定移植靜脈再狹窄的檢查方法； 2.制備出生物學(xué)相容性好的雷帕霉素納米粒，通過對(duì)其理化性質(zhì)和生物學(xué)特性進(jìn)行評(píng)價(jià)，確定該納米粒具有良好的緩釋效能和局部組織滯留能力； 3.在移植靜脈模型中，了解雷帕霉素納米粒移植靜脈血管腔內(nèi)局部灌注處理后局部靜脈組織和血漿中雷帕霉素的濃度、

3、毒副作用以及對(duì)移植靜脈內(nèi)膜和血漿腎上腺髓質(zhì)素(ADM)及內(nèi)皮素-1(ET-1)的影響； 4.探討血漿ADM和ET-1與兔移植靜脈再狹窄的關(guān)系； 5.在臨床試驗(yàn)中，探討體外循環(huán)和非體外循環(huán)冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)對(duì)血漿ADM和ET-1的影響。 方法 將研究分成兩部分進(jìn)行，笫一部分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，第二部分為臨床試驗(yàn)。 在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，首先對(duì)建立的兔移植靜脈模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用游離的頸外靜脈間位移植至頸

4、總動(dòng)脈之間的方法建立兔移植靜脈模型，共18只，分別于術(shù)后7天、14天及28天各處理6只兔，在處死前，彩色多普勒超聲檢測(cè)移植靜脈內(nèi)膜厚度、狹窄處靜脈內(nèi)徑、最大血流速度、最小血流速度、搏動(dòng)指數(shù)(PI)和阻力指數(shù)(RI)；處死后，組織學(xué)病理定量分析移植靜脈內(nèi)膜厚度和內(nèi)徑，相應(yīng)的對(duì)側(cè)正常頸外靜脈作為對(duì)照；Spearman 相關(guān)分析法分析彩色多普勒超聲和組織病理學(xué)檢查結(jié)果的相關(guān)性。其次，雷帕霉素納米粒的制備和理化特性評(píng)價(jià)。采用溶劑擴(kuò)散法，以不同濃

5、度的卡波姆為乳化劑制備具有生物粘附性的雷帕霉素納米粒，并用相應(yīng)的方法對(duì)納米粒的理化性質(zhì)表征，包括形態(tài)學(xué)、平均粒徑和粒徑分布、Zeta電位、包封率、載藥量以及體外釋放等進(jìn)行評(píng)價(jià)；在兔移植靜脈模型中，對(duì)納米粒的生物學(xué)性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，分為兩組，每組各5只，一組用自制的藥物灌注裝置對(duì)移植靜脈血管腔內(nèi)局部灌注不含納米粒子的生理鹽水，另一組用同樣的方法灌注所制備的雷帕霉素納米粒，術(shù)后7天切取兩組的移植靜脈，對(duì)其行形態(tài)學(xué)分析，顯微鏡下觀察血管周圍炎性反

6、應(yīng)程度，評(píng)價(jià)納米粒的生物學(xué)相容性。 再次，探討不同濃度雷帕霉素納米粒移植靜脈血管腔內(nèi)局部灌注處理后的藥理學(xué)行為。根據(jù)所處理的雷帕霉素納米粒濃度的不同，將模型兔分為兩組，每組各20只，低濃度組為100μg/ml，高濃度組為500μg/ml，分別于術(shù)后1天、7天、14天及28天各處理5只兔，心臟穿刺留取血標(biāo)本后處死，采用高效能液相層析法(High performance liquid chromatography，HPLC)檢測(cè)局部

7、靜脈組織中雷帕霉素的藥物濃度，血標(biāo)本用于肝腎功能檢查和血漿雷帕霉素藥物濃度的測(cè)定，組織病理學(xué)檢查術(shù)后28天的移植靜脈內(nèi)膜厚度。 最后，分析雷帕霉素納米粒移植靜脈血管腔內(nèi)局部灌注對(duì)兔移植靜脈內(nèi)膜和血漿ADM及ET-1的影響。將模型兔分為三組，每組各10只，實(shí)驗(yàn)組用雷帕霉素納米粒(500 μg/ml)對(duì)移植靜脈行血管腔內(nèi)局部灌注處理，對(duì)照組用相同濃度的雷帕霉素納米粒周圍靜脈給藥，空白組不做任何處理，分別于術(shù)前和術(shù)后即刻、1天和7天抽

8、取靜脈血，采用放射免疫法測(cè)定三組血漿ADM及ET-1的濃度；術(shù)后28天時(shí)切取移植靜脈，行蘇木精-伊紅染色(HE染色)和Van Gieson膠原染色，采用Image proplus 6.0圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)各組移植靜脈內(nèi)膜厚度、內(nèi)徑、內(nèi)膜/中膜厚度比以及膠原容積指數(shù)；Pearson相關(guān)分析法分析移植靜脈內(nèi)膜厚度、內(nèi)徑、內(nèi)膜/中膜厚度比以及膠原容積指數(shù)和血漿ADM及ET-1濃度的相關(guān)性。 在臨床試驗(yàn)部分，探討體外循環(huán)和非體外循環(huán)CAB

9、G對(duì)患者血漿ADM和ET-1的影響。選取體外組、非體外組以及對(duì)照(普通開胸手術(shù))組患者各40例，分別于術(shù)前和術(shù)后即刻、1天、7天及14天抽取靜脈血，采用放射免疫法測(cè)定三組血漿ADM及ET-1的濃度。 結(jié)論 1.采用兔自體游離頸外靜脈間位移植至頸總動(dòng)脈之間的方法建立的靜脈移植模型能引起術(shù)后移植靜脈再狹窄；彩色多普勒超聲能精確檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的移植靜脈再狹窄的程度，與組織病理學(xué)檢查有良好的相關(guān)性；彩色多普勒超聲檢查操作方便、無創(chuàng)

10、傷、可以動(dòng)態(tài)觀察移植靜脈再狹窄的程度，為今后觀察移植靜脈再狹窄提供了較好的實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法。 2.本實(shí)驗(yàn)所制備的雷帕霉素納米粒具有一定的生物粘附性，較高的包封率和緩釋效能，與兔血管有良好的生物學(xué)相容性。 3.移植靜脈血管腔內(nèi)局部灌注雷帕霉素納米粒，可在局部靜脈組織中維持較高的藥物濃度，而血漿中的藥物濃度較低，增加了藥物對(duì)靶器官或組織的作用，避免了全身給藥對(duì)其他器官或組織所造成的影響；雷帕霉素納米粒濃度的不同，其在局部靜脈組織

11、和血漿中的濃度也不同，但對(duì)肝腎功能的影響不明顯；雷帕霉素納米粒濃度不同，對(duì)移植靜脈內(nèi)膜增生的抑制作用也不同；雷帕霉素納米粒移植靜脈血管腔內(nèi)局部灌注處理，可在局部靜脈組織中表現(xiàn)出良好的藥物緩釋能力，可維持較長(zhǎng)時(shí)間的藥物作用。 4.雷帕霉素納米粒移植靜脈血管腔內(nèi)局部給藥可抑制移植靜脈內(nèi)膜增生，抑制血漿ET-1及ADM濃度升高，保護(hù)血管內(nèi)皮功能，預(yù)防移植靜脈再狹窄；而雷帕霉素納米粒周圍靜脈給藥則無此作用；血漿ET-1及ADM與移植靜脈