雷帕霉素納米滴眼液和眼膏治療小鼠干眼癥的實驗研究.pdf

1、干眼癥又稱角結(jié)膜干燥癥，是一種淚液的質(zhì)和量異常，或淚液動力學異常導致的淚膜不穩(wěn)定和眼表組織損傷并伴有眼部不適癥狀為特征的一類疾病。近年來，干眼癥發(fā)病率逐漸上升，是目前國內(nèi)外常見的眼表疾病之一?；诿庖叩难装Y反應是干眼癥發(fā)病機制中最關(guān)鍵的因素之一，環(huán)孢霉素A是臨床用于治療干眼癥的有效免疫抑制劑，目前尚無對免疫抑制作用更強且全身毒副作用更小的雷帕霉素眼部制劑用于治療干眼癥的相關(guān)實驗研究報道。
　　 目的：
　　 本研究擬使用

2、新型免疫抑制劑雷帕霉素納米滴眼液和眼膏(同濟大學醫(yī)學院魏靜2007年碩士研究生畢業(yè)課題“雷帕霉素眼部制劑制備及藥物代謝分布”的研究成果)治療小鼠干眼癥，并且通過各項干眼評估指標進行療效觀察，以便尋求到更安全有效的免疫抑制劑治療干眼癥，為日后將雷帕霉素眼部制劑應用于臨床試驗治療干眼癥提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 選擇70只健康6周齡、雌性C57BL/6小鼠，其中10只作為正常組小鼠，其余60只建立小鼠干眼模型。通過對小鼠

3、腿部皮下注射5mg/ml的氫溴酸東莨菪堿溶液(抑制小鼠淚液分泌)和將小鼠置于風扇前(加速小鼠淚液蒸發(fā))，一共20天，建立小鼠干眼模型。干眼造模成功后將干眼小鼠隨機分為五組(每組均繼續(xù)皮下注射氫溴酸東莨菪堿溶液)，分別為干眼造模后不予藥物治療(干眼組)；干眼造模后使用0.0125％雷帕霉素納米眼液滴眼(干眼實驗I組)；干眼造模后使用0.025％雷帕霉素納米眼液滴眼(干眼實驗II組)；干眼造模后使用0.25％雷帕霉素眼膏涂眼(干眼實驗III

4、組)；干眼造模后使用0.5％雷帕霉素眼膏涂眼(干眼實驗IV組)。一共觀察4周，檢測正常組、干眼組與各實驗組小鼠淚液分泌量和角膜熒光素鈉染色變化情況；作病理切片HE染色觀察小鼠結(jié)膜上皮淋巴細胞浸潤情況、PAS染色觀察小鼠結(jié)膜上皮杯狀細胞破壞程度及破壞后的恢復程度；通過免疫組織化學SP法和real-timePCR方法觀察小鼠結(jié)膜組織中NF-kB基因表達的變化。
　　 結(jié)果：
　　 雷帕霉素治療干眼小鼠2w后，各實驗組均能使干

5、眼小鼠淚液分泌量增多(P<0.05)，結(jié)膜上皮杯狀細胞數(shù)量增多(P<0.01)(實驗I組和實驗II組卻不能使干眼小鼠結(jié)膜上皮杯狀細胞數(shù)量增多(P>0.05))，NF-kB基因表達下降(P<0.01)(其中實驗III組下調(diào)NF-kB基因表達效果較其余實驗組顯著(P<0.01)，實驗Ⅳ組下調(diào)NF-kB基因表達效果較其余實驗組差(P=0.000))；
　　 雷帕霉素治療干眼小鼠4w后，各實驗組均能使干眼小鼠淚液分泌量明顯增多(p=0.

6、000)，結(jié)膜上皮杯狀細胞數(shù)量增多(P<0.05)，NF-kB基因表達明顯下降(P=0.000)(其中實驗III組下調(diào)NF-kB基因表達效果較其余實驗組顯著(P=0.000)，實驗Ⅳ組下調(diào)NF-kB基因表達效果較其余實驗組差(P<0.01))。
　　 結(jié)論：
　　 雷帕霉素眼部制劑能增加小鼠淚液分泌量和結(jié)膜上皮杯狀細胞的數(shù)量，下調(diào)小鼠結(jié)膜組織中NF-kB基因的表達從而抑制干眼小鼠結(jié)膜炎癥反應，對小鼠干眼具有良好的治療效果