雷帕霉素對小鼠記憶T細胞的體外作用.pdf

1、第一部分:建立小鼠皮膚移植排斥模型穩(wěn)定獲得記憶T細胞 目的：建立一種穩(wěn)定的通過小鼠皮膚移植獲得小鼠記憶T細胞的方法，為研究藥物對小鼠記憶T細胞的體外作用做準備。 方法：以C57BL/6小鼠為受者、DBA/2小鼠為供者行皮膚移植；同時行C57BL/6小鼠行同種同系皮膚移植做對照。術后1-8周，每周取小鼠脾臟，使用流式細胞儀檢測所有受體鼠脾單個核細胞懸液中記憶T細胞的比例(n=6)。 結論：接受同種異系皮膚抗原刺激4

2、-5周后，小鼠記憶T細胞發(fā)生穩(wěn)態(tài)增殖，此模型可以穩(wěn)定的獲得小鼠記憶T細胞。 第二部分:雷帕霉素對小鼠記憶T細胞的體外作用 目的：探討雷帕霉素對小鼠記憶T細胞的體外生長及白介素-2(IL-2)表達的影響，比較其與初始T細胞對雷帕霉素的敏感性差異，并且初步探討雷帕霉素對小鼠記憶T細胞抑制作用的機制。 方法：取6周齡以下的C57BL/6小鼠脾臟制備成脾單個核細胞，使用免疫磁珠法分選出小鼠初始T淋巴細胞；取第一部分實驗中

3、經(jīng)過同種異系皮膚移植存活6周以上的C57BL/6小鼠，熒光激活細胞分類術(FACS fluorescence-activated cell sorting)分選出小鼠記憶T細胞。將分選出的小鼠初始和記憶T細胞分別加入0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml梯度濃度的雷帕霉素培養(yǎng)液培養(yǎng)72h后，采用MTT法及Elisa法測定各組細胞的生長情況及IL-2表達情況。同樣于72小時后測定10ng/ml雷帕霉素濃度組及對照組(