雷帕霉素對Aβ25-35致PC12細(xì)胞損傷的干預(yù)作用.pdf

1、目的：觀察雷帕霉素（Rapamycin，RAPA）對β淀粉樣蛋白25-35（beta-amyloid peptide25-35，Aβ25-35）誘導(dǎo)的大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤（rat pheochromocytoma，PC12）細(xì)胞損傷的干預(yù)作用，并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：（1）傳代培養(yǎng)PC12細(xì)胞。（2）噻唑藍(lán)（Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide， MTT）比色法檢測不同濃度Aβ25-35作用2

2、4 h的PC12細(xì)胞的存活率。確定建立細(xì)胞損傷模型的Aβ25-35的工作濃度。（3）以不同濃度梯度的RAPA與工作濃度的Aβ25-35共同作用于PC12細(xì)胞24h。MTT法檢測細(xì)胞存活率，確定RAPA低、中、高三個干預(yù)濃度。（4）將對數(shù)生長期的PC12細(xì)胞隨機(jī)分為5組：正常對照（Control）組、模型（Model）組和RAPA低、中、高三個劑量組。Control組采用DMEM培養(yǎng)細(xì)胞；Model組采用DMEM和工作濃度的Aβ25-35

3、共同培養(yǎng)細(xì)胞；RAPA低、中、高劑量組分別用不同濃度的RAPA、DMEM和Aβ25-35共同培養(yǎng)細(xì)胞。Hoechst33342熒光染色法檢測細(xì)胞的凋亡率；ELISA法檢測各組細(xì)胞胰島素樣生長因子受體（Insulin-like Growth Factor-1 Receptor, IGF-1R）的表達(dá)量；Western Blot檢測各組細(xì)胞磷酸化蛋白激酶 B（ Phosphorylation of protein kinase B， p-P

4、KB）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（Phosphorylation of mammalian Target of Rapamycin，p-mTOR）以及磷酸化tau蛋白(Phosphorylation of tau protein，p-tau)的表達(dá)量。
　　結(jié)果：（1）與0μmol/L的Aβ25-35組比較，隨著Aβ25-35濃度的升高，PC12細(xì)胞的存活率有所下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P＜0.05），且與 Aβ25-35的濃度呈負(fù)

5、相關(guān)(r=0.980)。其中，20μmol/L的Aβ25-35組細(xì)胞存活率為51.93±2.30％。因此，采用該濃度構(gòu)建PC12細(xì)胞損傷模型。（2）與Model組（51.47±2.59%）比較，不同濃度的RAPA組細(xì)胞存活率（54.64±2.42%、59.91±2.53%、64.79±2.91%、62.73±2.35%、56.50±2.55%）升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），確定 RAPA低、中、高三個劑量分別是10μmol/

6、L、40μmol/L和160μmol/L。（3）與Control組（3.33±2.45%）相比，Model組細(xì)胞凋亡率（52.22±2.33%）增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與Model組比較，RAPA組細(xì)胞凋亡率（45.33±2.83%、36.89±2.85%、48.00±2.83%）降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（4）與Control組（650.26±60.26 pg/mL）相比，Model組細(xì)胞的IGF-1

7、R表達(dá)（314.74±65.75 pg/mL）降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與Model組相比，RAPA組IGF-1R表達(dá)（470.00±53.17 pg/mL、573.95±55.60 pg/mL、420.00±53.02 pg/mL）升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（5）與Control組（p-PKB：0.44±0.02、p-mTOR：0.62±0.01、p-tau:1.53±0.04）相比， Model組細(xì)胞

8、p-PKB表達(dá)（0.33±0.01）降低，p-mTOR表達(dá)（1.97±0.05）和p-tau表達(dá)（2.09±0.19）升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與Model組相比，RAPA組p-PKB表達(dá)（0.37±0.006、0.42±0.010、0.40±0.01）升高，p-mTOR表達(dá)（1.64±0.05、0.66±0.04、0.35±0.01）和p-tau表達(dá)（2.02±0.15、1.79±0.05、1.86±0.06）降低，差

9、異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：（1）隨著 Aβ濃度增加，PC12細(xì)胞存活率降低。（2）在一定范圍內(nèi)，隨著RAPA干預(yù)濃度的增加，Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的存活率升高，凋亡率降低。（3）在一定濃度下的RAPA可抑制p-mTOR表達(dá)，增加p-PKB水平，降低p-tau表達(dá)，減少細(xì)胞凋亡。（4）RAPA減少Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡，提高存活率，其對Aβ25-35致PC12損傷的保護(hù)作用機(jī)制可能與RAP