2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  本研究旨在探討玉郎傘多糖(YLSPS)對體外建立的擬阿爾海默茨病模型(PC12細胞)的干預作用;觀察淀粉樣蛋白25-35肽段(Aβ25-35)和地塞米松(Dexamethasone,DXM)聯合誘導PC12細胞時的活力損傷效應;及其作用在基因和蛋白水平上可能的相關機制,為進一步開發(fā)玉郎傘多糖在神經系統(tǒng)相關疾病的治療提供實驗參考。
  方法:
  1.Aβ25-35聯合DXM對PC12細胞的損傷效應研究:(1

2、)根據干預因素不同,實驗分組分為四組,分別為:①空白對照組(不加任何藥物誘導);②單用Aβ25-35誘導;③單用DXM誘導④聯合誘導組(聯合應用Aβ25-35與DXM)。(2)體外培養(yǎng)類神經元PC12細胞,培養(yǎng)至85%細胞密度時,按照上述分組給予藥物誘導,作用24小時,分別從以下幾個方面進行檢測:①在倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)學變化;②采用CCK-8比色法檢測各組細胞增殖情況變化;③通過LDH法檢測各組細胞胞膜損傷程度變化;④通過

3、流式細胞儀以AnnexinⅤ-HTC/PI雙染法,檢測各組細胞早期及總凋亡率變化。
  2.玉郎傘多糖對聯合藥物誘導的類神經元PC12細胞擬阿爾海默茨病模型的干預作用的可能機制研究:培養(yǎng)至80%細胞密度時,根據上述分組給予藥物誘導和藥物干預,誘導藥物和干預藥物(玉郎傘多糖)前后各作用24小時,然后分別以熒光定量PCR法、免疫組織化學法檢測各組細胞中APP、Bax、Bcl-2、caspase-3的mRNA表達、蛋白表達水平;west

4、ern blot法檢測各組細胞Bax、Bcl-2蛋白表達水平。
  結果:
  1.Aβ25-35和DXM在一定濃度范圍內均對PC12細胞有毒性作用,且其毒性作用呈劑量依賴關系。在此基礎上,選擇10μM的Aβ25-35(24h)和0.0750μM的DXM(24h)聯合作用建立細胞損傷模型,培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的測定與CCK-8的結果基本一致,顯示玉郎傘多糖(YLSPS)劑量性依賴地減少了細胞中LDH的漏出;由流式細胞

5、儀檢測的結果表明,YLSPS可以減少模型細胞凋亡性死亡。
  2.熒光定量PCR法結果顯示,與對照組比較,模型組APP、Bax、caspase-3 mRNA的表達水平明顯升高(P<0.05);與模型組比較,玉郎傘多糖高組能降低APP、Bax、caspase-3的mRNA表達水平(P<0.05),而對Bcl-2 mRNA的表達水平影響不明顯(P>0.05);玉郎傘多糖低劑量組能降低Bax、caspase-3 mRNA水平(P<0.0

6、5)。
  3.免疫組化結果顯示,與模型組比較,玉郎傘多糖各給藥組均能不同程度地下調APP、Bax、caspase-3,而上調Bcl-2蛋白的陽性表達(P<0.05); western blot結果顯示,玉郎傘多糖高、中劑量組均能降低Bax蛋白表達(P<0.05),而提高Bcl-2蛋白表達(P<0.05)。
  結論:
  1.Aβ25-35聯合DXM作用于PC12細胞,可使細胞增殖受抑制,呈現凋亡損傷變化;
 

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