刺參巖藻多糖對(duì)PC12細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、刺參（Stichopusjaponicas）是我國(guó)北方唯一的食用海參，渤海灣至江蘇連云港的周邊海域?yàn)槠渲饕植嫉貛А＝陙?lái)的研究發(fā)現(xiàn)，刺參多糖具有廣泛的生物活性，包括抗凝血、抗腫瘤、抗病毒、增強(qiáng)免疫力等，但有關(guān)刺參多糖及其復(fù)合物對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用仍少見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)從鮮刺參中用現(xiàn)代工藝提取分離得到刺參巖藻多糖，研究其對(duì)PC12細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行了初步的研究。論文的主要內(nèi)容如下:
　　 1.刺參巖藻多

2、糖的提取和分離純化。在實(shí)驗(yàn)室前期研究基礎(chǔ)上，采用雙酶解之后加醇沉的方法提取得到刺參粗提物，大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行脫色，純化過(guò)程用DEAE-Sephrose柱進(jìn)行首次分離，紫外210nm、280nm結(jié)合苯酚硫酸法監(jiān)測(cè)各流出組分，得到4個(gè)峰，對(duì)其有活性的3號(hào)峰進(jìn)行收集，命名為SJP-3，后用Superdex200對(duì)其進(jìn)行第二次分離純化，得到SJP-3A、SJP-3B兩個(gè)峰，G-25柱脫鹽，對(duì)脫鹽組分進(jìn)行冷凍干燥，選用活性較好的SJP-3A(SJ

3、P-3)進(jìn)行后續(xù)的研究。
　　 對(duì)SJP-3進(jìn)行理化性質(zhì)分析，表明SJP-3為均一組分，其分子量為179000Dal;硫酸鋇比濁法測(cè)得其硫酸根含量為29.75％;苯酚硫酸法測(cè)得其糖含量為57.18％。
　　 2.刺參巖藻多糖對(duì)PC12細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用研究。我們首先研究了SJP-3對(duì)PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)及活力的影響，發(fā)現(xiàn)SJP-3濃度低于500μg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞基本無(wú)毒性作用。采用10mmol/LNa2S2O4對(duì)

4、PC12細(xì)胞進(jìn)行缺氧損傷2h，隨后復(fù)氧培養(yǎng)24h，構(gòu)建缺氧/復(fù)氧損傷模型，研究SJP-3對(duì)它的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)表明，100、300、500μg/mL的SJP-3可有效改善缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，提高細(xì)胞存活率，減少LDH滲漏，降低MDA值，提高SOD活力，Hoechst33342熒光染色以及Annexin/PI雙染的流式檢測(cè)結(jié)果表明，缺氧/復(fù)氧損傷引起了PC12細(xì)胞的凋亡，加入SJP-3進(jìn)行保護(hù)可減輕細(xì)胞凋亡。
　　 3.

5、刺參巖藻多糖抗缺氧/復(fù)氧損傷作用的初步機(jī)制研究。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組（正常組、模型組、各劑量SJP-3保護(hù)組）線粒體膜電位，westernblot檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)以研究SJP-3抗缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)機(jī)理。線粒體膜電位檢測(cè)表明，損傷模型組線粒體膜電位降低，Bax/Bcl-2比值升高，裂解的caspase-3、caspase-9等蛋白表達(dá)增加，預(yù)先加入SJP-3進(jìn)行保護(hù)可穩(wěn)定線粒體膜電位，降低Bax/Bcl-2比值，caspase-3、ca

6、spase-9表達(dá)減少。以上結(jié)果提示，SJP-3抗PC12細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用與穩(wěn)定線粒體膜電位，抵抗線粒體/Cyt-C途徑的凋亡有關(guān)。
　　 本實(shí)驗(yàn)以PC12細(xì)胞建模，對(duì)SJP-3抗神經(jīng)細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用進(jìn)行了研究，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行了探討。通過(guò)實(shí)驗(yàn)初步確定了SJP-3抗神經(jīng)細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用機(jī)制，為臨床防治腦缺血/再灌注引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷提供了潛在的理論依據(jù)和可能的藥物來(lái)源，為海洋生物多糖的高值化利用提供