氯化錳對PC12細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的: 以多巴胺能神經(jīng)元PC12細(xì)胞作為靶細(xì)胞，觀察氯化錳作用后，對細(xì)胞增殖及凋亡的影響，并檢測其凋亡相關(guān)基因Hsp70、Survivin、Bc1-2和Bax表達(dá)情況，以探討氯化錳致PC12細(xì)胞凋亡作用的分子機(jī)理。 方法: 體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞，氯化錳作用后，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)及形態(tài)學(xué)變化；MTT比色試驗(yàn)檢測PC12細(xì)胞的增殖情況，篩選錳的毒作用劑量譜：流式細(xì)胞術(shù)(FCM)及DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測PC1

2、2細(xì)胞凋亡；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測PC12細(xì)胞Hsp70、Survivin、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)情況及定位。 結(jié)果: 氯化錳處理24 h后PC12細(xì)胞形態(tài)明顯改變。氯化錳能抑制PC12細(xì)胞的增殖，呈時間-劑量效應(yīng)關(guān)系，400 umol/L氯化錳作用48小時，PC12細(xì)胞的增殖抑制率為58.4％。氯化錳能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)顯示氯化錳誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡呈劑量依賴性，各染毒組與對照組比較差異有顯著性

3、(P<0.01)；DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示DNA Ladder。氯化錳作用后，細(xì)胞Bax蛋白的表達(dá)呈劑量依賴性增強(qiáng)，且與PC12細(xì)胞凋亡之間呈正相關(guān)關(guān)系(R1=0.972,P<0.01)；細(xì)胞Hsp70、Survivin、Bcl-2蛋白的表達(dá)呈劑量依賴性下調(diào)，且與PC12細(xì)胞凋亡之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(R2=-0.990，R3=-0.976，R4=-0.980，P均<0.01)。 結(jié)論: 氯化錳作用于PC12細(xì)胞一定時間后，能

4、明顯抑制其增殖，并呈時間-劑量效應(yīng)關(guān)系；氯化錳作用于PC12細(xì)胞24h后，能誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡，并呈劑量依賴性；在氯化錳的作用下，PC12細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)呈劑量依賴性增高，且與PC12細(xì)胞凋亡有正相關(guān)關(guān)系；Hsp70、Survivin、Bc1-2蛋白的表達(dá)呈劑量依賴性降低，且與PC12細(xì)胞凋亡有負(fù)相關(guān)關(guān)系。所以，氯化錳誘導(dǎo)PC12細(xì)胞發(fā)生凋亡可能是多個凋亡調(diào)控基因共同參與的結(jié)果：可能是通過上調(diào)促凋亡基因Bax，下調(diào)凋亡抑制基因Bc1-