QMA對H2O2誘導PC12細胞凋亡的保護作用研究.pdf

1、目的：探討H2O2誘導的PC12細胞（大鼠嗜鉻細胞瘤細胞，pheochromocytoma cell）氧化應(yīng)激損傷及多胺類化合物（polyamine analogues，QMA）對其的保護作用。
　　方法：采用不同濃度H2O2（100、300、500、700μmol/L）造成PC12細胞損傷模型，運用 MTT法對不同濃度H2O2對PC12細胞的活細胞數(shù)量進行檢測，確定其對PC12細胞的最適合的損傷濃度；研究多胺類化合物QMA的細胞

2、保護作用，倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)改變，結(jié)合MTT檢測法評價多胺類化合物QMA、陽性藥NAC、尼莫地平對PC12細胞的存活率的影響；通過吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙錠（Ethidium bromide，EB）雙染法配合活細胞高內(nèi)涵成像系統(tǒng)對PC12細胞的凋亡形態(tài)變化和特征進行記錄；用羅丹明123（Rhodamine123，Rh123）染色法通過高內(nèi)涵成像系統(tǒng)及流式細胞儀對細胞的線粒體膜電位的變化進行測定；通過D

3、CFH-DA染色使用流式細胞儀對細胞內(nèi)ROS水平進行測定，作為對多胺類化合物抗氧化作用的補充說明；通過活細胞高內(nèi)涵成像系統(tǒng)，用免疫組織化學法測定活化caspase-3的表達，研究多胺類化合物抗氧化作用的可能機制。
　　結(jié)果：1.H2O2（終濃度為500μmol/L）作用PC1224h后，細胞的抑制率顯著升高，而終濃度為1μmol/L，5μmol/L，25μmol/L的QMA可明顯改善細胞的凋亡形態(tài)，H2O2造成的PC12細胞的細胞

4、抑制顯著降低，并顯現(xiàn)出對濃度的依賴性。2.PC12細胞經(jīng)
　　500μmol/L H2O224小時的損傷后，觸發(fā)了胞內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，導致細胞出現(xiàn)氧化應(yīng)激損傷，誘導線粒體的膜電位的降低，增加了細胞內(nèi)ROS含量。3.多胺類化合物QMA可顯著減低細胞內(nèi)的ROS含量，抑制H2O2介導的線粒體的膜電位的降低，明顯改善了H2O2介導的凋亡形態(tài)，抑制活化caspase-3的表達。
　　結(jié)論：通過體外實驗證明，多胺類化合物QMA為 H2O