6-氟基丁基苯酞對H-,2-O-,2-誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討6-氟基丁基苯酞(3-butyl-6-fluoro-1(3H)-isobenzofuranone，F(xiàn)-NBP)對H2O2(hydrogen peroxide)介導(dǎo)的PC12細(xì)胞(大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞，pheochromocytoma cell)損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。
　　 方法：運(yùn)用不同濃度的連二亞硫酸鈉(1，2，4，8，10 mM)對PC12細(xì)胞進(jìn)行損傷，通過MTT法了解在不同時間里PC12細(xì)胞的損傷情況，確定出

2、引起細(xì)胞損傷的最佳作用濃度和作用時間，并研究了6-氟基丁基苯酞和對照品丁基苯酞的保護(hù)作用。運(yùn)用不同濃度的H2O2(100，300，500，700，1000μM)對PC12細(xì)胞進(jìn)行損傷，通過MTT法了解在不同時間里PC12細(xì)胞的損傷情況，確定出引起細(xì)胞損傷的最佳作用濃度和作用時間，并研究了6-氟基丁基苯酞和對照品丁基苯酞的保護(hù)作用。同時采用GSH-PX，MDA等試劑盒檢測H2O2對PC12細(xì)胞的氧化損傷，并研究6-氟基丁基苯酞的抗氧化作用

3、及其機(jī)制，為進(jìn)一步確定6-氟基丁基苯酞的抗氧化特性，使用DCF-DA檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的水平情況。另外，對H2O2介導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡進(jìn)行了進(jìn)一步的探討，采用熒光倒置顯微鏡、活細(xì)胞高內(nèi)涵成像系統(tǒng)檢測凋亡細(xì)胞的形態(tài)，用活細(xì)胞高內(nèi)涵分析系統(tǒng)對細(xì)胞線粒體膜電位的水平也進(jìn)行了分析。
　　 結(jié)果：2 mM的連二亞硫酸鈉處理PC12細(xì)胞24小時損傷效果最好，而濃度為5μM，10μM，50μM的6-氟基丁基苯酞可顯著提高PC12細(xì)胞損傷抑制率

4、，分別達(dá)到13％，43％，82％，且具有濃度依賴性。500μM的H2O2處理PC12細(xì)胞24小時損傷效果最好，而濃度為5μM，10μM，50μM的6-氟基丁基苯酞可顯著提高PC12細(xì)胞損傷抑制率，分別達(dá)到20％，50％，70％，且具有濃度依賴性。H2O2可顯著誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷，造成胞內(nèi)GSH-PX降低和MDA的增加，并使細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高，觸發(fā)氧化應(yīng)激對細(xì)胞進(jìn)行損傷，6-氟基丁基苯酞對上述的氧化損傷有抑制作用，對PC12細(xì)胞具

5、有保護(hù)作用。500μM的H2O2接觸細(xì)胞24小時后，通過熒光倒置顯微鏡、活細(xì)胞高內(nèi)涵成像系統(tǒng)觀察發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞顯著增加，而預(yù)先給與6-氟基丁基苯酞作用2小時，可明顯降低細(xì)胞凋亡。另外，通過測定熒光染料羅丹明123(Rh123)的熒光強(qiáng)度可以反映細(xì)胞線粒體膜電位的變化，H2O2能顯著降低線粒體膜電位的水平，而6-氟基丁基苯酞則具有一定的保護(hù)作用。
　　 結(jié)論：
　　 1.2 mM的連二亞硫酸鈉可介導(dǎo)PC12細(xì)胞缺糖缺氧損傷，

6、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。一定濃度的6-氟基丁基苯酞預(yù)處理2小時可明顯抑制連二亞硫酸鈉誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷和凋亡的作用。
　　 2.500μM的H2O2可介導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷，觸發(fā)氧化損傷，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。一定濃度的6-氟基丁基苯酞預(yù)處理2小時可明顯抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷和凋亡的作用。
　　 3.6-氟基丁基苯酞的神經(jīng)保護(hù)作用可能是通過清除細(xì)胞內(nèi)ROS，抑制細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)的。6-氟基丁基苯酞可能在腦缺