尼莫地平對(duì)H-,2-O-,2-誘導(dǎo)動(dòng)脈血管平滑肌損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：在離體豬腦基底動(dòng)脈和人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞水平上，觀察尼莫地平對(duì)抗H202誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷和抗細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。為臨床應(yīng)用尼莫地平提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：(1)采用去內(nèi)皮離體血管環(huán)灌流的方法，建立H2O2損傷模型。隨機(jī)分為正常(未處理)組、H2O2(2×10-4 mol·L-1)損傷組、維生素C(104mol·L-1)預(yù)處理組、尼莫地平高、中、低劑量(5×10-6 mol·L-1，5×10-7mol·L-1，5×10-8

2、mol·L-1)預(yù)處理組血管，比較各組血管環(huán)對(duì)KCl、苯腎上腺素和H2O2收縮的影響；檢測(cè)各組血管組織勻漿中的SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(過氧化氫酶)、GStt-PX(谷胱甘肽過氧化物酶)活性及MDA(丙二醛)含量。(2)培養(yǎng)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，觀察尼莫地平(10-7～10-10 mol·L-1)、維生素C(10-4 mol·L-1)對(duì)抗H2O2(10-4 mol·L-1)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的情況。用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力；流式細(xì)胞儀

3、及Hoechst染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；采用免疫組化染色方法檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞Caspase-3的表達(dá)。 結(jié)果：(1)a.H2O2損傷組與正常組比較，血管環(huán)對(duì)KCl、苯腎上腺素和H2O2的收縮反應(yīng)明顯增加(P<0.05)；維生素C不能緩解H2O2損傷后血管對(duì)KCl、苯腎上腺素的收縮反應(yīng)增強(qiáng)現(xiàn)象，只能緩解對(duì)H2O2的收縮反應(yīng)；尼莫地平高、中、低劑量呈劑量依賴性抑制KCI、苯腎上腺素和H2O2對(duì)血管環(huán)的收縮反應(yīng)(P<0.01)。b.H

4、2O2損傷組MDA含量升高， SOD、CAT、GSH-PX活性降低，與正常組比較，有顯著性差異(P<0.05)。尼莫地平高、中、低劑量和維生素C均能降低組織中MDA含量，升高SOD、CAT、GStt-PX的活性，與H2O2損傷組比較，差異顯著(P<0.05)。(2)H2O2損傷組使人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞活力降低；細(xì)胞凋亡率有所增加，熒光染色顯示典型的凋亡小體，表現(xiàn)為核固縮、碎裂；Caspase-3表達(dá)增加(P<0.05)。不同劑量尼莫地平均

5、能顯著提高平滑肌細(xì)胞活力(P<0.05)，其中10-9mol·L-1濃度的尼莫地平組較其他濃度組更有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；該濃度也能減少細(xì)胞凋亡率，熒光染色顯示凋亡小體減少，降低Caspase-3的表達(dá)(P<0.05)，與維生素C組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：鈣通道阻斷劑尼莫地平具有抗氧化應(yīng)激作用，同時(shí)也可對(duì)抗H2O2誘導(dǎo)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的凋亡，比維生素C更能預(yù)防H2O2對(duì)腦基底動(dòng)脈血管的氧化損傷；其機(jī)制可能與降低Cas