血管NO神經對頸總動脈血管平滑肌增殖的影響.pdf

1、研究目的：
　　探討血管一氧化氮（nitric oxide，NO）神經對血管平滑肌增殖的影響及調控作用，為防治增生性血管疾病提供理論依據(jù)。
　　實驗方法：
　　一、實驗分組與熒光金(Fluoro-gold,FG)逆行追蹤
　　將實驗分為5組：（1）模型存活1d組;(2)模型存活5d組;(3)一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)抑制劑N’-硝基-L精氨酸（Nω-Nitro-L-argi

2、nine，LNNA）組，腹腔注射 LNNA15 mg/kg，共6天；（4）切交感神經組；（5）假手術組。FG逆行追蹤具體方法是：將大鼠仰臥位,取頸部正中切口約3 c m，逐層分離組織至暴露右側頸總動脈鞘，用玻璃微管注射器往動脈外膜和中膜間緩慢注射1μl30%熒光金，留針15分鐘；存活一周后用4%多聚甲醛灌注，分別取頸交感神經節(jié)和頸總動脈，每組3只動物用于western bolt檢測增殖細胞核抗原（Proliferating cell n

3、ucle antigen，PCNA）的表達。
　　二、FeCl3誘導平滑肌增殖模型
　　將大鼠仰臥位固定，沿頸部正中線切開3cm左右的切口，將右側頸總動脈暴露，用一5cm×2cm的塑料膜片墊在頸總動脈下方，在頸總動脈上方置一2×1 mm含有1μL2.16 mol/L FeCl3的濾紙[1]，20 min后，取出濾紙和膜片，縫合皮膚，平滑肌增殖模型制成。
　　三、NOS免疫組織化學染色和HE染色
　　將切片用0.0

4、1 PBS洗后，用含0.04％雙氧水的甲醇封閉；正常羊血清封閉20 min；入NOS抗體（1：500）4℃過夜；生物素化二抗室溫30 min；SABC室溫30 min， DAB顯色3 min；以上各步之間用0.01M PBS沖洗3次，封片,微鏡下觀察NOS表達。取各組頸總動脈作切片和HE染色，觀察血管平滑肌增殖變化。
　　結果：
　　FG逆行示蹤表明頸總動脈壁主要由頸上神經節(jié)支配，頸交感神經節(jié)NOS免疫組織化學染色與FG示蹤

5、雙標表明支配頸總動脈的交感神經中含有NO神經，并且NO神經支配頸總動脈。HE染色表明，血管受損后一天平滑肌就開始增殖，5天組增殖明顯；但NOS抑制劑組（LNNA）和切除頸血管交感神經組比5天組增殖更明顯。Western blot結果表明5天組與假手術組相比PCNA表達上調，而LNNA組和切除神經組PCNA表達上調更明顯。
　　結論：
　　1.支配頸總動脈的交感神經含NO神經。
　　2.血管交感神經中NO神經參與了平滑肌