扇貝多肽對H-,2-O-,2-所致胸腺細胞氧化損傷的保護作用及其機制.pdf

1、目的:探討在H<,2>O<,2>氧化處理下,扇貝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri)對小鼠胸腺細胞氧化損傷的保護作用及其機制.方法:建立H<,2>O<,2>對體外培養(yǎng)的小鼠胸腺細胞氧化損傷的病理模型.試驗設計分為6組:對照組,H<,2>O<,2>模型組,H<,2>O<,2>+0.5%PCF組,H<,2>O<,2>+0.25%PCF組,H<,2>O<,2>+0.125%PCF組和H<,2>O<,2>+0

2、.1%Vc組.臺盼藍拒染法檢測細胞存活率;MTT法檢測細胞增殖活性;瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA ladder;酶生化法測定胞漿超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及細胞抗超氧陰離子能力(A-ASC)和總抗氧化能力(T-AOC);透射電鏡觀察細胞超微結構的改變;流式細胞儀PI染色測定細胞凋亡率;Fluo-3-AM熒光染色測定細胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<,i>;羅丹明123(

3、Rhodamine 123)熒光染色測定線粒體膜電位;免疫細胞化學檢測細胞P53、Bcl-2、Bax蛋白的表達量;原位雜交檢測細胞p21WAF1 mRNA、p38mRNA的基因表達量;結果在12.5 μ M H<,2>O<,2>處理下,PCF在0.125%~0.5%濃度范圍內(nèi)能顯著提高小鼠胸腺細胞的活性;抑制H<,2>O<,2>所致胸腺細胞早、中和晚期凋亡的形態(tài)學改變,維持細胞的正常超微結構;抑制胸腺細胞DNA梯狀帶的出現(xiàn);降低胸腺細胞

4、凋亡率;顯著提高胞漿中SOD、GSH-Px的活性,降低ROS、MDA含量,提高A-ASC及T-AOC含量;降低胸腺細胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<'i>;穩(wěn)定線粒體膜電位;抑制H<,2>O<,2>處理后小鼠胸腺細胞P53蛋白和Bax蛋白在胞漿中的表達,增強Bcl-2蛋白的表達;同時還可抑制H<,2>O<,2>處理后小鼠胸腺細胞p21<'WAF1> mRNA和p38mRNA的表達.以上統(tǒng)計結果均有顯著性差異(P<0.01,P<0.05).結

5、論扇貝多肽能提高體外培養(yǎng)的小鼠胸腺細胞的活性,抑制H<,2>O<,2>氧化所誘導的胸腺細胞凋亡,對H<,2>O<,2>所致氧化損傷的小鼠胸腺細胞具有保護作用.其機制與PCF能清除氧自由基、提高抗氧化酶活性、降低細胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<,i>、保護細胞膜相結構、減少DNA斷裂有關;同時與PCF能抑制突變型P53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表達,增強凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達以及抑制p21<'WAF1> mRNA、p38mRNA的表達,