迷迭香酸拮抗H-,2-O-,2-誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及作用機(jī)制.pdf

1、目的：研究迷迭香酸對H2O2誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304凋亡的抑制作用及其機(jī)制?！　》椒ǎ翰捎皿w外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304，首先用H2O2孵育細(xì)胞24小時，用流式細(xì)胞術(shù)鑒定內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率；用吖啶橙熒光染色(AO染色)觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)，確定H2O2誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的最佳濃度。然后按如下分組并處理：(1)正常對照組；(2)H2O2損傷組；(3)迷迭香酸(0.3、1、3、10μmol/L)+H2O2組；(4)維生素E+H

2、2O2組。在迷迭香酸和維生素E預(yù)處理該細(xì)胞30分鐘后，加入H2O2繼續(xù)培養(yǎng)24小時，應(yīng)用MTT比色法檢測迷迭香酸對細(xì)胞活性的影響；流式細(xì)胞儀檢測法和Tunel法檢測迷迭香酸對細(xì)胞凋亡率的影響；用Western-blotting檢測不同分組處理24小時細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)情況和第24小時caspase-3活性?！　〗Y(jié)果：內(nèi)皮細(xì)胞用H2O2孵育24小時，低濃度的H2O2(0.1mmol/L，0.2mmol/L)凋

3、亡不明顯，0.5mmol/LH2O2時細(xì)胞凋亡明顯，細(xì)胞熒光染色出現(xiàn)核濃縮、碎裂等凋亡特征，細(xì)胞凋亡率達(dá)24.4％；同時伴有Bcl-2蛋白表達(dá)減弱，Bax蛋白表達(dá)增加，caspase-3蛋白活性增強(qiáng)。而用不同濃度迷迭香酸預(yù)先保護(hù)可見：(1)MTT法檢測H2O2孵育內(nèi)皮細(xì)胞24h，細(xì)胞活性由正常時1.00±0.02下降到0.69±0.02。不同濃度的迷迭香酸與H2O2共同孵育內(nèi)皮細(xì)胞，呈濃度依賴性的增加內(nèi)皮細(xì)胞活性，0.3、1、3、10μ

4、mol/L迷迭香酸使細(xì)胞活性分別恢復(fù)到0.71±0.07、0.78±0.05、0.84±0.03、0.89±0.03，與H2O2組相比，1、3、10μmol/L迷迭香酸預(yù)處理組數(shù)據(jù)有顯著差異(P＜0.05)；(2)流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示：0.5mmol/LH2O2明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，凋亡率為23.53±3.77％，不同濃度的迷迭香酸使細(xì)胞凋亡率呈濃度依賴性下調(diào)(20.01±0.70％、12.47±1.36％、10.4±0.40％、6.57±4

5、.24％，p＜0.05)；(3)TUNEL法染色細(xì)胞鏡下觀察，棕褐色深染的陽性細(xì)胞明顯減少，鏡下凋亡細(xì)胞計數(shù)與流式細(xì)胞計數(shù)一致：H2O20.5mmol/L作用24h后部分細(xì)胞核呈棕褐色，凋亡細(xì)胞計數(shù)25.5±2.12％，迷迭香酸0.3、1、3、10μmol/L降低細(xì)胞凋亡，凋亡率分別為21.3±2.15％、17.5±1.23％、14.5±1.23％、10.5±1.51％，P＜0.05。(4)Western-blotting分析細(xì)胞中Bc