咖啡酸抗過氧化氫誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡及機制的初步探討.pdf

1、目的:用 H2O2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞株凋亡建立氧化應(yīng)激模型,觀察咖啡酸(Caffeic acid,CA)對H2O2誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(HUVEC-12)凋亡的保護作用并初步探討其機制。
　　方法:分別用不同濃度的咖啡酸和H2O2處理 HUVEC-12,通過MTT法檢測細胞的活力,流式細胞術(shù)鑒定內(nèi)皮細胞凋亡率,用吖啶橙溴化乙啶熒光染色(AO-EB染色)觀察細胞凋亡形態(tài),RT-PCR及Western blot分別檢測NF-κB

2、、P53和Bcl-2的基因和蛋白表達。為了檢測H2O2或CA對內(nèi)皮細胞作用的量效關(guān)系,分別用0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mmol/L的H2O2或0.1,1.0,10,100μmol/L的CA作用細胞24小時;同時,為了檢測H2O2或CA對內(nèi)皮細胞作用的時效關(guān)系,采用上述濃度的H2O2或CA分別對細胞作用3、6、12、24和48小時。
　　結(jié)果:用不同濃度 H2O2(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol/L)孵

3、育細胞24小時后,細胞存活率隨藥物濃度的增加依次下降;0.2 mmol/L H2O2孵育細胞24小時后,NF-κB基因和蛋白表達呈濃度依賴性上調(diào),加入NF-κB阻斷劑PDTC(100μmol/L)后,細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,凋亡細胞減少,同時P53表達下調(diào),Bcl-2表達上調(diào)。和不同濃度咖啡酸共同孵育細胞24小時,MTT提示,咖啡酸能明顯減輕H2O2對HUVEC-12的損傷,提高細胞的存活率,流式細胞檢測術(shù)提示咖啡酸能使H2O2誘導(dǎo)的HU