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文檔簡介
1、冠脈介入治療作為冠心病的有效治療手段備受關(guān)注,介入治療使用的支架材料也成為研究熱點。目前研究中可降解鎂合金支架系統(tǒng)因其降解產(chǎn)物鎂離子的生物安全性較高尤其受到關(guān)注。鎂離子被證實具有抗氧化作用,可調(diào)節(jié)e NOS/NO途徑,改善內(nèi)皮細(xì)胞功能。研究表明TGF-β1/SMAD3信號通路可能在冠心病發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色。而NO可通過c GMP依賴的方式抑制TGF-β1/SMADs調(diào)節(jié)的基因轉(zhuǎn)錄激活,因而鎂離子可能通過調(diào)節(jié)NO的生成來調(diào)控TGF
2、-β1/SMAD3信號途徑。
目的:建立氧化損傷模型,評估鎂-1釔合金材料的抗氧化、減輕炎癥及調(diào)控TGF-β1/SMAD3信號通路的相關(guān)作用。
方法:以濃度100umol/ml過氧化氫在細(xì)胞培養(yǎng)箱誘導(dǎo)細(xì)胞2小時制作氧化損傷模型組。選擇胞融合至80%~90%培養(yǎng)瓶細(xì)胞,按1∶4傳代。待傳代細(xì)胞生長至70%左右,作為實驗分組用細(xì)胞,實驗分為過氧化氫處理組(用過氧化氫氧化損傷2小時,然后更換為10%胎牛血清的DEME培養(yǎng)液
3、在溫度為37℃,5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時)、氧化后浸提液組(用PBS洗滌氧化損傷細(xì)胞兩次,然后更換為浸提液37℃,5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時)、單純浸提液組(無氧化處理,使用浸提液37℃,5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)正常細(xì)胞24小時)、對照組:37℃,5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的無處理因素正常細(xì)胞。Elisa法測量氧化產(chǎn)物8-羥基脫氧鳥苷酸(8-OHDG)、IL-6,NO及TGF-β1/SMAD3含量。
結(jié)果:鏡下可見
4、在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,對照組正常細(xì)胞形態(tài)為梭形,胞核多為卵圓形,可見細(xì)胞核仁,表現(xiàn)為“鋪路石”樣排列。氧化損傷模型組在經(jīng)過100微摩爾每升過氧化氫處理2小時后可見到單層狀態(tài)的內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生了明顯的腫脹,細(xì)胞間連接減少,大片細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)液中。在加入Mg-1Y金屬浸提液繼續(xù)培養(yǎng)后24小時后可見內(nèi)皮細(xì)胞排列仍然雜亂,但腫脹較前減輕,彼此連接較前增多。單純浸提液培養(yǎng)細(xì)胞鏡下也可見明顯腫脹,彼此連接較正常細(xì)胞減少,也存在不同程度的細(xì)胞脫落及漂浮現(xiàn)象。
5、
氧化處理組與對照組8-OHDG及IL-6濃度升高,NO濃度減少;氧化后浸提液組與對照組8-OHDG濃度升高;氧化后浸提液組與氧化處理組8-OHDG、IL-6濃度降低,NO濃度增加。單純浸提液組與過氧化氫處理組比較8-OHDG濃度降低,NO濃度增加,TGF-β1及SMAD3濃度降低。單純浸提液組與對照組NO濃度降低, IL-6濃度增加;氧化后浸提液組與對照組及氧化處理組TGF-β1及SMAD3無顯著性差異。
結(jié)論:1
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