維生素C對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)人A375黑素瘤細(xì)胞氧化損傷的保護(hù).pdf

1、目的:觀察維生素C對(duì)受H2O2氧化損傷后人A375黑素瘤細(xì)胞的抗氧化保護(hù)作用，為維生素C作為抗氧化劑治療白癜風(fēng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.將100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L的H2O2溶液分別處理人A375黑素瘤細(xì)胞1h、2h、4h后，用MTT比色法篩選最適濃度及時(shí)間建立H2O2損傷模型。
　　2.予 H2O2損傷模型用0.1μmol/ml、0.5μmol/ml、1.0μmol/ml、1

2、.5μmol/ml、2.0μmol/ml、2.5μmol/ml、3.0μmol/ml、4.0μmol/ml、5.0μmol/ml的維生素C溶液處理12小時(shí)后，行MTT比色法篩選出最適實(shí)驗(yàn)濃度；用2.0μmol/ml維生素C處理H2O2損傷模型2h、6h、12h、24h、36h、48h后，同法篩選出最適實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
　　3.用終濃度為0.1μmol/ml、1.0μmol/ml、2.0μmol/ml、4.0μmol/ml的維生素C分別處

3、理H2O2損傷模型6h、12h、24h、36h后，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖，Annexin V/PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，NaOH裂解法測(cè)定黑素含量。
　　結(jié)果:
　　1. H2O2對(duì)人 A375黑素瘤細(xì)胞帶來(lái)氧化損傷，細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變且增殖受抑制，損傷程度呈濃度依賴性。
　　2. MTT結(jié)果顯示：0.1μmol/ml、1.0μmol/ml、2.0μmol/ml、4.0μmol/ml四種濃度的維生素C加入后，細(xì)胞增殖

4、水平高于H2O2損傷組，差異顯著(P<0.05)；維生素C濃度為4μmol/ml、培養(yǎng)時(shí)間為12h時(shí)，A490值達(dá)最大（0.945±0.044）。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：各維生素C實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞存活率呈濃度依賴性升高；早期凋亡率及晚期凋亡率逐漸下降，皆低于H2O2損傷組。
　　4.NaOH裂解法結(jié)果顯示：0.1μmol/ml、1.0μmol/ml、2.0μmol/ml、4.0μmol/ml四種濃度的維生素C可促進(jìn)H2O2