蝦青素對過氧化氫誘導的小梁網(wǎng)細胞氧化損傷的保護作用.pdf

1、目的:氧化應激在青光眼患者小梁網(wǎng)結(jié)構(gòu)損傷和功能失調(diào)中起重要作用。蝦青素作為一種天然的類胡蘿卜素具有抗炎、抗癌、抗氧化的功能。本研究致力于探索蝦青素對小梁網(wǎng)細胞氧化應激的保護作用及可能的機制。
　　方法:選取生長良好的HTM細胞，用DMEM低糖完全培養(yǎng)基均勻接種于6孔板或96孔板中，每日于倒置顯微鏡下觀察。當細胞生長接近80％左右時，分別用不同濃度的過氧化氫（0.4mM-1.5mM）或蝦青素（0.1μM-500μM）處理細胞，觀察3

2、h，6h，12h，24h細胞狀態(tài)，并檢測處理后24h時細胞活力，選取0.9mM過氧化氫和1μM蝦青素作為本實驗后續(xù)所用的濃度。當細胞生長接近80％左右時，用0.9mM過氧化氫內(nèi)孵育1h。1h后，將蝦青素加入含過氧化氫的細胞培養(yǎng)液中，蝦青素的終濃度為1μM。在過氧化氫處理后24h，觀察細胞形態(tài)，DAPI染色觀察細胞核形態(tài)，用CCK-8試劑盒檢測細胞活力，RT-PCR用于檢測Caspase3(CASP3)、Bcl-2(BCL2)和Bax（B

3、AX)三種與凋亡相關(guān)mRNA的表達量。DCFH-DA熒光探針用于檢測小梁網(wǎng)細胞內(nèi)ROS水平。SOD和MDA的表達量用比色法測定。懸浮芯片系統(tǒng)用于分析細胞培養(yǎng)液中炎癥因子的含量。
　　結(jié)果:不同濃度蝦青素處理24小時后發(fā)現(xiàn)，當蝦青素濃度小于100μM時HTM細胞活力和細胞形態(tài)與對照組相比無顯著改變;不同濃度過氧化氫處理24小時后發(fā)現(xiàn)，0.4mM和0.5mM過氧化氫組細胞活力和對照組相比無顯著差異，當過氧化氫濃度≥0.6mM時，隨著過

4、氧化氫濃度升高，細胞活力逐漸下降，細胞形態(tài)異常。0.9mM過氧化氫內(nèi)孵育1h后加入1μM蝦青素繼續(xù)孵育23h后發(fā)現(xiàn)，1)與過氧化氫組相比，蝦青素處理可顯著提高小梁網(wǎng)細胞的細胞活力(1.6倍，p＜0.05)。2）、與過氧化氫組相比，蝦青素處理組BCL2(3.31倍，P＜0.01)的表達水平顯著升高，而BAX(0.32倍，P＜0.01)和CASP3(0.59倍，P＜0.01)表達量顯著降低。3）、蝦青素可抑制過氧化氫損傷導致的小梁網(wǎng)細胞RO

5、S(0.57倍，p=0.226)生成增多。與過氧化氫損傷組相比，蝦青素處理組SOD(1.64倍，p＜0.05)生成量顯著增多，而MDA(0.62倍，p＜0.05)生成量顯著減少。4）、蝦青素降低過氧化氫誘導的Th-17通路細胞因子表達增多（IL-17A，0.5倍，p＜0.05; IL-17F，0.8倍，p＜0.05;IL-21，0.67倍，p＜0.05; IL-21，0.69倍，p=0.353; IL-23，0.16倍，p＜0.01)，