二氫睪酮對過氧化氫誘導(dǎo)的ECV-304細胞凋亡的保護作用.pdf

1、目的：研究二氫睪酮(DHT)對過氧化氫誘導(dǎo)的ECV-304細胞凋亡的保護作用及可能機制，分析雄激素對血管內(nèi)皮細胞及動脈粥樣硬化的作用。
　　 方法：采用合適濃度過氧化氫(H2O2100μM)誘導(dǎo)損傷ECV-304細胞，造成細胞凋亡模型；利用不同濃度二氫睪酮(0.02，0.1，1μM)預(yù)處理細胞；根據(jù)不同處理方法將實驗細胞分為6組：正常對照組，單純H2O2損傷組，低濃度DHT處理組(0.01μM)，中濃度DHT處理組(0.1μM)

2、，高濃度DHT處理組(1μM)，高濃度DHT對照組(1μM).通過光鏡觀察細胞形態(tài)、MTT法檢測細胞活性和流式細胞儀檢測凋亡細胞比例，觀察二氫睪酮對過氧化氫誘導(dǎo)的細胞凋亡的保護作用；通過WestemBlot法檢測Caspase-3、Caspase-9和phospho-p38 MAPK表達，觀察此種保護作用的可能機制。
　　 結(jié)果：⑴在正常對照組和高濃度DHT對照組(1μM)可見極少量凋亡細胞；單純H2O2損傷組，大部分細胞顯示出

3、凋亡的征象，比如染色質(zhì)分離、染色體濃縮、胞體皺縮等；在另外三組不同濃度DHT處理組中，凋亡細胞比例隨著DHT濃度升高而逐漸降低。提示DHT具有拮抗H2O2誘導(dǎo)的細胞凋亡作用，并且這一作用呈現(xiàn)劑量依賴性。⑵與正常對照組和高濃度DHT對照組比較，單純H2O2損傷組OD值顯著下降；不同濃度DHT處理組，OD值隨著DHT濃度升高而逐漸升高，高濃度DHT處理組OD值與正常對照組和高濃度DHT對照組比較無顯著差異.提示實驗所用濃度DHT無明顯細胞毒

4、作用，并且具有保護細胞活性作用，作用強弱與濃度呈正相關(guān)。⑶與正常對照組比較，單純H2O2損傷組凋亡細胞比例顯著增加(49.96％ vs2.95％)。不同濃度DHT處理組(0.01，0.1和1μM)凋亡細胞比例明顯降低，并且呈劑量依賴性(33.54％、20.04％和6.76％)。正常對照組和高濃度DHT對照組凋亡細胞比例沒有顯著差異(2.95％ vs3.92％).提示DHT顯著降低H2O2誘導(dǎo)的細胞凋亡，這種保護作用呈現(xiàn)一種劑量依賴性。⑷

5、DHT可以抑制H2O2誘導(dǎo)的ECV-304細胞內(nèi)Caspase-3，Caspase-9和phospho-p38 MAPK的蛋白表達，其中高濃度DHT處理組條帶亮度最低，與正常對照組和高濃度DHT對照組接近，提示DHT抑制細胞凋亡的作用可能通過Caspase-3，Caspase-9和phospho- p38 MAPK等信號分子實現(xiàn)。
　　 結(jié)論：DHT對H2O2誘導(dǎo)的ECV-304細胞凋亡具有拮抗作用，合適濃度范圍內(nèi)，該作用呈現(xiàn)一