甘草酸二銨鹽(GAS)對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的HEPG2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及凋亡機(jī)理的研究.pdf

1、目的：探討GAS對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞（HEPG2）損傷的保護(hù)作用以及GAS抑制HEPG2細(xì)胞凋亡的機(jī)理。
　　方法：通過(guò)MTT法確定過(guò)氧化氫誘導(dǎo)HEPG2細(xì)胞凋亡的最佳濃度和時(shí)間（1600μmol/L、4h），使用治療藥物GAS進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)MTT選取GAS有效作用的低中高劑量（5μmol/L、25μmol/L、125μmol/L）。將實(shí)驗(yàn)分為五組，正常組、過(guò)氧化氫組、高劑量、中劑量、低劑量組。通過(guò)Hoechst33258染

2、色觀察各組細(xì)胞核形態(tài)的變化，觀察各組細(xì)胞凋亡的狀況。ALT、AST、MDA、SOD等生化試劑盒檢測(cè)各組指標(biāo)含量變化，闡述GAS的抗損傷作用。通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)Annxin-V/FITC/PI雙染檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。使用ELISA法檢測(cè)Caspase-3與Casepase-9兩種與凋亡相關(guān)的蛋白酶，Western Bl ot檢測(cè)不同組與凋亡相關(guān)的蛋白Bcl-2、Bax表達(dá)變化，最終探究GAS抑制HEPG2細(xì)胞凋亡的機(jī)理。
　　結(jié)果：濃

3、度為1600μmol·L－1過(guò)氧化氫作用的4h后鏡下觀察HEPG2細(xì)胞，結(jié)果發(fā)生細(xì)胞質(zhì)凝集，細(xì)胞核皺縮，與正常組相比Hoechst33258染色后模型組可見(jiàn)明顯的致密固縮形態(tài)和顆粒狀熒光；MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率達(dá)(52.20±1.13)％，與對(duì)照組及治療組相比有顯著性(P<0.01)，表明成功建立了HEPG2細(xì)胞凋亡模型。ALT、AST、MDA、SOD等生化指標(biāo)試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組ALT、AST、MDA含量升高，SOD

4、含量降低，劑量組檢測(cè)結(jié)果顯示其具有保護(hù)作用且呈劑量依賴(lài)性。使用流式細(xì)胞儀Annxin-V/FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀況，結(jié)果過(guò)氧化氫模型組（1600μmol/L、4h）凋亡率為（42.66±1.54）%，與正常組比較有顯著性差異(p<0.01)，結(jié)果顯示治療劑量組呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性的抑制細(xì)胞凋亡。使用ELISA法檢測(cè)Caspase-3與Casepase-9，與正常組相比，模型組兩種酶含量均顯著增加，劑量組呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性的降低Casp

5、ase-3與Casepase-9含量，顯示GAS具有抑制細(xì)胞凋亡的作用。Western blot結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組的Bcl-2（抑凋亡蛋白）表達(dá)顯著減少，Bax（促凋亡蛋白）表達(dá)顯著增加，給藥組上調(diào)Bcl-2，下調(diào)Bax的含量，呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性的抑制HEPG2的凋亡。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)條件下過(guò)氧化氫（1600μmol/L、4h）可引起HEPG2細(xì)胞的損傷，并且發(fā)生凋亡，GAS可保護(hù)HEPG2細(xì)胞，減輕損傷，抑制凋亡。各蛋