黃芪提取物對過氧化氫誘導(dǎo)的MRC-5細胞氧化損傷的保護作用.pdf

1、目的：研究黃芪多糖(APS)和黃芪甲苷(Astr)在過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的MRC-5人胚肺成纖維細胞氧化損傷細胞模型中，對無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1(APE/Ref-1)和硫氧還蛋白(Trx)表達的影響，分析 APS和Astr在氧化損傷過程中對MRC-5細胞的保護機制。
　　方法：將培養(yǎng)的MRC-5細胞隨機分組：空白對照組、不同濃度 H2O2組、Astr和APS處理組。通過H2O2作用于MRC-5細胞建立細胞氧化

2、損傷模型，使用MTT法檢測H2O2對 MRC-5細胞的增殖抑制率，待 H2O2作用的MRC-5細胞氧化損傷模型建立后，用最佳H2O2濃度與不同濃度的APS、Astr共同作用于MRC-5細胞，確定APS、Astr對氧化損傷MRC-5細胞的最佳作用濃度；MRC-5細胞DNA氧化損傷情況則采用免疫熒光檢測8-羥脫氧鳥苷(8-OHdG)含量；應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測MRC-5細胞的凋亡；采用反轉(zhuǎn)錄 PCR分析 Trx和APE/Ref-1 mRNA的表

3、達；Western blot法檢測 Trx和APE/Ref-1蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：實驗表明，經(jīng)過氧化氫孵育24h的MRC-5細胞，可誘發(fā)細胞損傷，細胞存活力以劑量依賴性方式降低。800μmol/L H2O2濃度時建立細胞氧化損傷模型。與H2O2引起氧化損傷的模型組相比，細胞經(jīng)Astr和APS與H2O2共孵育后，明顯抑制H2O2引起的APE/Ref-1、Trx蛋白表達下調(diào),降低8-OHdG含量，抑制MRC-5細胞凋亡,細胞存