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文檔簡介
1、目的:建立人臍靜脈內(nèi)皮細胞氧化損傷模型,研究當歸紅芪超濾膜提取物對H2O2誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV-304氧化損傷的影響,并初步探討其作用機制。 方法:通過酶消化法對離體的人臍靜脈內(nèi)皮細胞系ECV-304細胞進行消化傳代,建立過氧化氫(H2O2)誘導的ECV-304細胞氧化損傷模型。采用超濾技術對當歸紅芪合劑進行分離與純化,以不同分子量、不同濃度的當歸紅芪超濾膜提取物作用于氧化損傷的ECV-304細胞,采用MTT法測定ECV-
2、304細胞的活性及存活率,黃嘌呤氧化酶法檢測細胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法檢測細胞內(nèi)丙二醛(MDA)活力,考馬斯亮蘭法檢測細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的含量,流式細胞儀分析細胞周期及檢測細胞內(nèi)Ca2+含量,RT.PCR檢測細胞內(nèi)AT1 mRNA的表達,觀察當歸紅芪超濾膜提取物對H2O2誘導ECV-304細胞氧化損傷的影響。 結果:經(jīng)0.5mmol/LH2O2刺激后細胞活性明顯降低,SOD活力明顯降低,MDA活力明顯
3、提高,G0/G1期細胞的數(shù)目明顯增加,S期細胞的數(shù)目明顯減少,細胞內(nèi)Ca2+含量明顯增加(P<0.01),AT1mRNA表達增加(p<0.05);與H2O2組相比,當歸紅芪超濾膜提取物可以增強H2O2誘導ECV-304細胞氧化損傷的細胞活性,增加細胞的存活率且以作用72h為佳,提高氧化損傷的ECV-304細胞的SOD活力,降低氧化損傷的ECV-304細胞的MDA活力,促進氧化損傷的ECV-304細胞向S期轉變,減少氧化損傷的ECV-30
4、4.細胞內(nèi)Ca2+含量,減少細胞內(nèi)ATlmRNA表達(p<0.01,p<0.05),且以5萬分子量以下為佳。 結論:H2O2對離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞株ECV-304細胞有明顯地致氧化損傷作用;當歸紅芪超濾膜提取物可有效抑制H2O2誘導的ECV-304細胞的氧化損傷,保護血管內(nèi)皮細胞,且以5萬分子量以下、高濃度、72h為佳;當歸紅芪超濾膜提取物對氧化損傷血管內(nèi)皮細胞的保護作用可能與其提高了抗氧化酶活性,降低了脂質(zhì)過氧化物活性,
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