當歸紅芪超濾膜提取物對H2O2誘導(dǎo)PC12細胞損傷的影響.pdf

1、目的:研究當歸紅芪超濾膜提取物對過氧化氫(H2O2)所致PC12細胞損傷的影響并探討其作用機制。
　　方法:本研究采用不同劑量H2O2以不同時間作用于PC12細胞,篩選出最佳損傷劑量及時間,最終選用200μmol·L-1 H2O2與PC12細胞共同孵育6h,建立細胞氧化應(yīng)激損傷模型,加用高(1.5g·L-1)、中(0.75g·L-1)、低(0.375g·L-1)三個不同劑量的當歸紅芪超濾膜提取物(10萬分子量)進行干涉分組,實驗共

2、分為5組:對照組,模型組,當歸紅芪超濾膜提取物高劑量組,當歸紅芪超濾膜提取物中劑量組,當歸紅芪超濾膜提取物低劑量組。用MTT法測定各組細胞存活率的變化;采用生化法檢測細胞脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)含量、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用雙氯熒光黃乙酸乙酯(DCF-DA)染色,熒光酶標儀檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量;采用流式細胞術(shù)檢測各組細胞的凋亡率;采用羅丹明123(RH123)染色,激光共聚焦顯微鏡檢測細

3、胞線粒體膜電位變化;用蛋白印跡法檢測Caspase-3、Bax和Bcl-2相關(guān)蛋白的表達。
　　結(jié)果:
　　1.各組細胞存活率的變化:H2O2損傷PC12細胞后細胞活力下降明顯,與對照組相比,模型組PC12的存活率明顯下降(p<0.05);與模型組相比,當歸紅芪超濾膜提取物干涉組PC12的存活率均明顯增加(p<0.05),以高劑量組最為顯著。
　　2.各組細胞MDA、LDH、SOD的檢測結(jié)果:與對照組相比,模型組MDA

4、、LDH含量增多,SOD含量下降(p<0.05);與模型組相比,當歸紅芪超濾膜提取物干涉組MDA、LDH均含量降低,SOD含量均增加(p<0.05)。
　　3.各組細胞內(nèi)ROS含量的檢測結(jié)果:與對照組相比,模型組ROS的含量明顯增多(p<0.05);與模型組相比,當歸紅芪超濾膜提取物干涉組ROS含量均顯著降低(p<0.05)。
　　4.各組細胞凋亡率的檢測結(jié)果:與對照組相比,模型組PC12細胞凋亡增加顯著(p<0.05);與

5、模型組相比,當歸紅芪超濾膜提取物干涉組細胞凋亡明顯降低(p<0.05)。
　　5.細胞線粒體膜電位檢測結(jié)果:與對照組相比,模型組PC12細胞內(nèi)RH123熒光強度明顯減弱,線粒體膜電位降低(p<0.05);與模型組相比,當歸紅芪超濾膜提取物干涉組PC12細胞內(nèi)RH123熒光強度均明顯增強,線粒體膜電位升高(p<0.05)。
　　6. Caspase-3、Bax和Bcl-2檢查結(jié)果:與對照組相比,模型組Caspase-3、Bax

6、蛋白表達增強,Bcl-2表達減弱,Bcl-2/Bax比值降低(p<0.05);與模型組相比,當歸紅芪超濾膜提取物干涉組Bax、Caspase-3蛋白表達均減弱,Bcl-2表達均增強,Bcl-2/Bax比值升高(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.當歸紅芪超濾膜提取物對過氧化氫誘導(dǎo)的PC12細胞損傷具有保護作用。
　　2.當歸紅芪超濾膜提取物可以通過降低氧化損傷的PC12細胞胞內(nèi)MDA、ROS的含量,增加細胞SOD活力