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1、目的:觀察當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的保護(hù)作用和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因在此過(guò)程中的作用,探討其在心腦血管疾病治療中的機(jī)制。 方法:用0.5mmol/LH2O2制造HUVEC損傷模型;按分組把不同濃度(0.5g/L、1.0 g/L、2.0g/L),不同分子量(2萬(wàn)分子量,5萬(wàn)分子量,10萬(wàn)分子量)的當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物于損傷后加入,分別測(cè)定細(xì)胞活力(MTT法)觀察歸紅芪
2、超濾膜提取物對(duì)H2O2損傷內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響;黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)細(xì)胞中超氧化物歧化酶(SOD),活力硫代巴比妥酸法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量;流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期,細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量。半定量逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶連(RT-PCR)法檢測(cè)eNOSmRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果:1.0.5mmol/L過(guò)氧化氫作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞后,SOD活力降低,MDA活力升高,G0/G1期細(xì)胞的數(shù)目明顯增加,S期細(xì)胞的數(shù)目明顯減少;細(xì)胞
3、內(nèi)Ca2+含量明顯增加(P<0.01):細(xì)胞凋亡增加(P<0.01);eNOS基因在轉(zhuǎn)錄水平出現(xiàn)表達(dá)降低(P<0.01,P<0.05)。2.當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)H2O2損傷內(nèi)皮細(xì)胞作用后,SOD活力升高,MDA活力降低降低,G0/G1期細(xì)胞的數(shù)目明顯減少,S期細(xì)胞的數(shù)目明顯增加;細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量明顯減少(P<0.01)。細(xì)胞凋亡降低(P<0.01);eNOS基因在轉(zhuǎn)錄水平出現(xiàn)表達(dá)增加(P<0.01,P<0.05)。以5萬(wàn)分子量以下為
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