β-NGF對過氧化氫損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：本研究以人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞為研究對象，利用過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)其氧化損傷構(gòu)建損傷模型，進(jìn)而研究β-NGF對血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：離體培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs），建立H2O2致HUVECs損傷模型后，利用低、高不同濃度濃度為1、10、100M的β-NGF處理氧化損傷的HUVECs細(xì)胞，同時設(shè)置未氧化損傷對照組和損傷后PBS對照組。MTT方法測定各組HUVECs細(xì)胞活力變化；流式細(xì)胞術(shù)檢

2、測各組細(xì)胞的凋亡率和活性氧ROS含量變化；觀察各組HUVECs細(xì)胞中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）的含量變化;同時檢測各組HUVECs細(xì)胞中處理不同時間內(nèi)皮素（ET-1）和一氧化氮（NO）分泌含量變化；Western-blot方法檢測各組HUVECs細(xì)胞中TrkA、p75NTR及caspase-3蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：H2O2誘導(dǎo)HUVECs氧化損傷后，與未損傷對照組相比，氧化損傷后PBS對照

3、組 HUVECs細(xì)胞活力顯著下降；而細(xì)胞凋亡率和產(chǎn)生 ROS含量均顯著上升；細(xì)胞產(chǎn)生MDA含量顯著上升，而SOD和GSH活性顯著下降；細(xì)胞中分泌ET-1含量顯著上升而NO分泌量顯著下降；但與氧化損傷后PBS對照組相比，1、10?M的β-NGF處理組的HUVECs細(xì)胞活力均顯著上升；而 HUVECs細(xì)胞凋亡率和產(chǎn)生 ROS含量均顯著下降；MDA量顯著下降，SOD和GSH活性顯著上升；ET-1分泌含量逐漸下降而 NO分泌含量逐漸上升，且均具

4、有統(tǒng)計學(xué)意義。同時Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)1、10、100M的β-NGF處理均可以顯著誘導(dǎo)TrkA表達(dá)，進(jìn)而抑制caspase-3的表達(dá)，但對p75NTR表達(dá)影響不明顯。
　　結(jié)論：本課題研究發(fā)現(xiàn)β-NGF可以提升H2O2氧化損傷HUVECs后的細(xì)胞活力，并降低細(xì)胞凋亡率和ROS產(chǎn)生，并能夠降低HUVECs細(xì)胞中MDA含量，增加SOD和GSH分泌量從而提升HUVECs細(xì)胞抵抗氧化損傷能力，降低內(nèi)皮素ET-1的分泌量并提升N