三種植物提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、過(guò)多的活性氧能夠引起機(jī)體內(nèi)氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)的失衡，引起細(xì)胞氧化損傷。而氧化損傷會(huì)觸發(fā)細(xì)胞的自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，損傷細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)；會(huì)使蛋白質(zhì)或酶過(guò)度氧化，蛋白質(zhì)功能喪失，酶失去活性；與DNA、RNA發(fā)生交聯(lián)，造成基因表達(dá)異常，進(jìn)而引起一系列與氧化損傷有關(guān)的慢性疾病，如衰老、炎癥、神經(jīng)退行型疾病等。
　　松花粉提取物、葡萄籽提取物以及竹葉黃酮，三種植物提取物具有天然、無(wú)毒副作用的特點(diǎn)。其中，松花粉，是植物的生命精華，

2、被稱為“最佳健康品”。松花粉中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有抗氧化、免疫、抗炎等作用。葡萄籽提取物中富含原花青素，在對(duì)抗氧化應(yīng)激、抗炎、抗菌、預(yù)防心血管疾病、神經(jīng)保護(hù)作用等方面有良好效果。竹葉黃酮，其功能因子為水溶性的黃酮糖苷，具有抗自由基、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、抗輻射、抗菌等作用，亦可作為食品添加劑用于油脂等食品中。因此，作為良好的天然活性物質(zhì)，植物提取物在防御氧化損傷方面的功能受到越來(lái)越多的關(guān)注。
　　本論文中，我們研究松花粉提取物、葡萄籽

3、提取物、竹葉黃酮三種植物提取物對(duì)H2O2氧化損傷PC12細(xì)胞的可能的保護(hù)作用。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　1.利用MTT法，建立H2O2氧化損傷模型。選用100、150、200、300、400、500μM H2O2作用PC12細(xì)胞4 h后，與對(duì)照組相比，細(xì)胞存活率分別降為87.56％、55.38%、26.38%、9.26%、4.05%、3.37%。因此，選用150μM H2O2、作用時(shí)間4 h為氧化損傷模型。
　　2.采用MTT

4、法，選擇松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹葉黃酮三種植物提取物作用濃度梯度。PC12細(xì)胞經(jīng)三種植物提取物作用24 h，用150μM H2O2處理4 h后，測(cè)定細(xì)胞存活率。根據(jù)細(xì)胞存活率，確定松花粉提取物的作用濃度為25、50、100μg/mL；葡萄籽提取物的作用濃度為5、25、50μg/mL；竹葉黃酮的作用濃度為50、100、200μg/mL。
　　3.采用MTT法，測(cè)定松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹葉黃酮三種植物提取物在濃度范圍內(nèi)的

5、毒性，同時(shí)，測(cè)定三種提取物對(duì)氧化損傷 PC12細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果表明，三種提取物能夠提高氧化損傷 PC12細(xì)胞的存活率，且在所選濃度范圍內(nèi)，三種植物提取物均對(duì)PC12細(xì)胞無(wú)毒性。
　　4.檢測(cè)乳酸脫氫酶胞外釋放量、胞內(nèi)丙二醛、活性氧的含量，分別研究松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹葉黃酮對(duì)H2O2氧化損傷PC12細(xì)胞的細(xì)胞膜受損情況、脂質(zhì)過(guò)氧化情況以及細(xì)胞氧化水平的影響。結(jié)果表明，在作用濃度范圍內(nèi)，三種植物提取物均能夠降低氧化損傷細(xì)

6、胞胞外乳酸脫氫酶的釋放量；降低細(xì)胞的氧化水平以及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛的含量。
　　5.測(cè)定超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶活力以及谷胱甘肽含量，研究松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹葉黃酮對(duì)H2O2氧化損傷PC12細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶和抗氧化物的影響。結(jié)果表明，三種提取物能夠提高超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶活力以及提高細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的含量。這說(shuō)明，三種植物提取物可通過(guò)提高機(jī)體抗氧化酶活力和抗氧化物含量來(lái)發(fā)揮抗氧化作用。
　　6.采用JC-1熒

7、光探針?lè)?，測(cè)定松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹葉黃酮對(duì)H2O2氧化損傷PC12細(xì)胞的線粒體膜電位的影響。結(jié)果表明，三種植物提取物均能提高氧化損傷PC12細(xì)胞的線粒體膜電位，保護(hù)氧化損傷細(xì)胞線粒體膜的穩(wěn)定性。
　　7.采用PI單染法和RT-PCR法，測(cè)定松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹葉黃酮對(duì)H2O2氧化損傷 PC12細(xì)胞的細(xì)胞周期及相關(guān)周期蛋白的影響，對(duì)三種植物提取物保護(hù)機(jī)理進(jìn)行初步探究。結(jié)果表明，PC12細(xì)胞經(jīng)H2O2氧化損傷處理后