老鸛草素對H2O2誘導HepG2細胞氧化應激損傷的保護作用研究.pdf

1、老鸛草為多年生草本植物，在我國分布廣泛，資源豐富，并且具有多種藥理活性。老鸛草素(Geraniin)是老鸛草中的一種具有顯著抗氧化活性的多酚化合物。本研究擬探討是否老鸛草素能夠激活細胞中的Nrf2-ARE信號通路，誘導細胞中抗氧化酶的表達以及對HepG2細胞氧化應激損傷的保護作用，為其研制成一種抗氧化新藥提供了一定的科學基礎。
　　本文研究內(nèi)容與結(jié)果如下:
　　1、老鸛草素對H2O2誘導HepG2細胞損傷具有保護作用。Hep

2、G2細胞給予不同濃度的H2O2處理（空白組除外），采用MTT比色法篩選出最佳的H2O2的濃度(500μM)，并以此濃度制備細胞氧化應激損傷模型。結(jié)果表明，與空白組相比，H2O2損傷組的細胞生存率顯著降低。然而經(jīng)5μM、10μM、20μM三個濃度的老鸛草素預先處理24 h后，細胞的生存率顯著升高。同時，與倒置顯微鏡觀察得到的細胞形態(tài)相一致的。此外，在相同條件下，老鸛草素單獨處理對HepG2細胞的生長無顯著影響。
　　2、老鸛草素能夠

3、保護HepG2細胞免受H2O2誘導的細胞凋亡。HepG2細胞被隨機分為5組:空白對照組;H2O2損傷組;低、中、高濃度老鸛草素保護組（5μM、10μM、20μM）。結(jié)果顯示，與空白組相比，H2O2損傷組的細胞凋亡率明顯增加，然而老鸛草素治療組細胞凋亡率逐漸降低，細胞平均凋亡率降低程度與老鸛草素濃度成正比。進一步研究表明，老鸛草素可以減少由H2O2引起的細胞內(nèi)ROS水平的升高，維持了線粒體膜電位的穩(wěn)定。另一方面，老鸛草素減少了由H2O2誘

4、導的促凋亡蛋白Bax的表達，促進抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，從而抑制了Caspase-3的激活。
　　3、老鸛草素能誘導HepG2細胞抗氧化酶及Nrf2的核轉(zhuǎn)移。不同濃度的老鸛草素（5μM、10μM、20μM）分別作用HepG2細胞。結(jié)果表明，與對照組相比，老鸛草素藥物組細胞核內(nèi)Nrf2，血紅素氧化酶-1(HO-1)和醌氧化還原酶-1(NQO1)蛋白表達量和還原性谷胱甘肽(GSH)含量顯著提高，并呈一定的濃度依賴性。
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5、、老鸛草素通過激活HepG2細胞中PI3K/AKT和ERK1/2通路來保護細胞。不同濃度的老鸛草素(5μM、10μM、20μM)分別作用HepG2細胞。Western blotting檢測結(jié)果表明，老鸛草素顯著提高了細胞內(nèi)AKT和ERK1/2蛋白的磷酸化水平。采用AKT抑制劑LY294002和ERK1/2抑制劑U0126分別作用細胞。結(jié)果顯示老鸛草素對AKT和ERK1/2蛋白的磷酸化水平的上調(diào)作用、Nrf2的核轉(zhuǎn)移，HO-1和NQO1蛋

6、白表達量均被顯著抑制。此外，MTT結(jié)果顯示，AKT抑制劑LY294002和ERK1/2抑制劑U0126抑制了老鸛草素對細胞的保護作用。以上結(jié)果表明，老鸛草素在一定程度上是通過調(diào)節(jié)AKT和ERK1/2信號通路來保護細胞免受氧化應激損傷。
　　綜上所述，老鸛草素具有保護細胞免受H2O2引起的細胞凋亡，其作用機制與其能夠穩(wěn)定線粒體膜電位，增加Bcl-2/Bax比例和減少Caspase-3激活有關。此外，老鸛草素還可以激活Nrf2調(diào)控的抗