槲皮素對(duì)HepG2細(xì)胞二相酶的誘導(dǎo)作用.pdf

1、目的：研究槲皮素對(duì)HepG2細(xì)胞中三種二相酶的誘導(dǎo)作用并探索其濃度和時(shí)間依賴性及對(duì)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。 方法： 1．槲皮素對(duì)HepG2細(xì)胞二相酶的誘導(dǎo)作用。 培養(yǎng)狀態(tài)良好的HepG2細(xì)胞，隨機(jī)分為四組：對(duì)照組；低、中、高濃度槲皮素組（10 μM、20 μM、40 μM）。藥物與細(xì)胞共同孵育6、24小時(shí)分別測(cè)定以下指標(biāo)：采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定胞漿內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性；采用化學(xué)分光度法測(cè)定過氧化氫酶（C

2、AT）和醌氧化還原酶1（NQO1）的活性；用免疫印跡法（Western blotting）測(cè)定胞漿中醌氧化還原酶1（NQO1）及胞核中轉(zhuǎn)錄因子Nrf2的蛋白表達(dá)。 2．槲皮素對(duì)H2O2損傷的HepG2的保護(hù)作用測(cè)定。 培養(yǎng)狀態(tài)良好的HepG2細(xì)胞，隨機(jī)分為五組：對(duì)照組；H2O2損傷組（終濃度為2．4mM）；低、中、高濃度藥物組（10μM、20μM、40μM）。損傷組和藥物組加入H2O2，半小時(shí)后藥物組加入低、中、高濃度的

3、槲皮素，繼續(xù)培養(yǎng)6小時(shí)進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：采用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率；采用生化全自動(dòng)分析儀測(cè)定細(xì)胞上清液中AST活性；采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定細(xì)胞上清液中SOD活性。 結(jié)果： 1．槲皮素與細(xì)胞共同孵育6小時(shí)后，與對(duì)照組相比，藥物組的細(xì)胞內(nèi)二相酶SOD、CAT和NQO1活性均明顯提高（P<0．01，P<0．01，P<0．01），且呈濃度依賴性。24小時(shí)時(shí)，上述三種酶的活性均有不同程度的降低，呈一定的時(shí)間相關(guān)性。 2．槲皮素

4、與細(xì)胞共同孵育6小時(shí)后，與對(duì)照組相比，低、中、高濃度藥物組細(xì)胞內(nèi)NQO1和Nrf2的蛋白表達(dá)顯著提高（P<0．01，P<0．01）。 3．H2O2刺激細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，損傷組細(xì)胞生存率和SOD活性明顯下降，AST活性明顯增高（P<0．01，P<0．01，P<0．01），槲皮素與細(xì)胞共同孵育后，與損傷組相比，藥物組生存率和SOD活性均顯著提高（P<0．01，P<0．05），AST活性顯著下降（P<0．05，P<0．01），呈濃