白細(xì)胞介素-35對(duì)HepG2細(xì)胞功能的影響.pdf

1、原發(fā)性肝癌(primary liver cancer，PLC)是消化系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤之一，其中肝細(xì)胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)約占PLC的70-85％以上。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，HCC是世界上常見的五大實(shí)體惡性腫瘤之一，在腫瘤相關(guān)致死原因中居第二位，僅次于肺癌，已成為全世界性公共健康問題。HCC患者行根治性手術(shù)切除（包括激進(jìn)性切除）后，在其五年生存當(dāng)中，轉(zhuǎn)移和/或復(fù)發(fā)率達(dá)到了60-70％。如此高的臨床轉(zhuǎn)

2、移和復(fù)發(fā)率其根本原因在于HCC對(duì)于傳統(tǒng)治療方法（化學(xué)藥物治療和放射介入治療）具有很強(qiáng)的耐受性。
　　HCC是一種免疫原性腫瘤，這提示我們免疫治療技術(shù)可作為治療HCC的一種有效選擇途徑。目前臨床實(shí)踐中，已有將細(xì)胞因子、疫苗和活化的免疫細(xì)胞輸注作為定向免疫治療HCC的治療方法。隨著近些年來(lái)研究深入發(fā)現(xiàn)，腫瘤局灶微環(huán)境中的免疫抑制性網(wǎng)絡(luò)是限制腫瘤免疫治療療效的主要因素之一。腫瘤細(xì)胞是腫瘤局灶微環(huán)境中的重要構(gòu)成分子，其主要通過(guò)產(chǎn)生多種抑制

3、性細(xì)胞因子(如TGF-β和IL-10)和/或誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性細(xì)胞產(chǎn)生(Tregs和Bregs)等途徑，參與惡性腫瘤內(nèi)部免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的形成。細(xì)胞因子在信號(hào)傳導(dǎo)中擔(dān)當(dāng)著重要角色，是體內(nèi)重要的生物信息分子。它對(duì)調(diào)控腫瘤免疫應(yīng)答、維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境免疫穩(wěn)態(tài)等生物學(xué)事件有著重要影響。白細(xì)胞介素-35(interleukins-35，IL-35)是近些年來(lái)發(fā)現(xiàn)并命名的新型因子，其歸屬于IL-12家族細(xì)胞因子。IL-35在結(jié)構(gòu)上與該家族成員(IL-12、IL-

4、23和IL-27)具有相似性。但其在細(xì)胞來(lái)源和生物學(xué)功能等方面與同家族分子具有顯著的差異性。眾多文獻(xiàn)報(bào)道，IL-35在炎癥、器官移植、自身免疫及腫瘤等免疫方面均發(fā)揮著重要作用。IL-35是重要的負(fù)向調(diào)控因子，在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)免疫功能的發(fā)揮中起著重要作用。Maryam等采用qRT-PCR方法，從基因水平檢測(cè)了40例乳腺癌患者和正常女性外周靜脈血中IL-35兩亞基(p35和Ebi3)和Foxp3信使RNA(mRNA)的表達(dá)水平。

5、結(jié)果顯示，乳腺癌患者外周靜脈血中p35、Ebi3和Foxp3mRNA水平明顯上調(diào)較正常女性。提示IL-35在乳腺癌患者中表達(dá)水平升高，同時(shí)也可能對(duì)Tregs功能的發(fā)揮是必要的。目前研究表明，IL-35在多種惡性腫瘤（如食管癌、前列腺癌等）患者的腫瘤標(biāo)本和外周血中呈異常表達(dá)，但其在HCC患者中的表達(dá)情況及其對(duì)肝癌細(xì)胞的作用和機(jī)制罕見報(bào)道。因此，本研究旨在探討IL-35對(duì)HCC的作用及其對(duì)肝細(xì)胞癌細(xì)胞系HepG2功能的影響及初步機(jī)制。

6、>　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)收集解放軍第三0九醫(yī)院肝膽外科確診的55例HCC患者外周靜脈血標(biāo)本;同時(shí)留取16例年齡和性別分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的健康體檢者外周靜脈血標(biāo)本為正常對(duì)照組。使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)收集外周靜脈血中IL-35蛋白含量的表達(dá)情況。進(jìn)一步運(yùn)用外源性IL-35體外處理肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞。觀察IL-35對(duì)HepG2細(xì)胞增殖活性、侵襲和遷移生物學(xué)功能的影響及其可能發(fā)生機(jī)制。結(jié)果表明:1、HCC患者外周靜脈血上清中IL-35

7、蛋白含量[(118.45±28.66)ng/L]顯著高于健康體檢者外周靜脈血上清[(39.56±11.15)ng/L]，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2、外源性IL-35處理HepG2細(xì)胞組較對(duì)照組增殖活性、侵襲和遷移能力均具有顯著提高（P＜0.05）。3、IL-35對(duì)HepG2細(xì)胞的凋亡能力無(wú)明顯影響(P＞0.05)。4、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IL-35處理組(50μg/L)HepG2細(xì)胞表面受體gp130和IL-1

8、2Rβ2平均免疫熒光強(qiáng)度[(947.09±40.22)和(12.30±1.48)]相對(duì)陰性對(duì)照組[(785.89±89.68)和（9.07±2.01）]具有明顯的差異性(P＜0.05)。
　　通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論:1、HCC患者外周靜脈血上清中IL-35蛋白含量相較正常體檢者表達(dá)情況明顯上調(diào)，提示IL-35可能對(duì)HCC的發(fā)生發(fā)展具有一定的影響。2、IL-35具有促進(jìn)HCC細(xì)胞增殖活性、遷移和侵襲的生物學(xué)特性。3、IL-35對(duì)H