Surfactin對(duì)HepG2細(xì)胞的抗腫瘤作用研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)將surfactin作用于人肝癌細(xì)胞株HepG2，研究surfactin對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響以及誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)機(jī)理。
　　MTT實(shí)驗(yàn)表明，surfactin能明顯抑制HepG2的增殖，作用24h后，IC50值為42μg/mL;而surfactin對(duì)人正常肝細(xì)胞L-02沒(méi)有明顯的毒性作用。這說(shuō)明surfactin能夠特異性的誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡。
　　利用HE和Hoechest33342染色進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析，染

2、色結(jié)果顯示:在surfactin的作用下，HepG2細(xì)胞發(fā)生了胞質(zhì)濃縮、核崩解等典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變;利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，surfactin作用48小時(shí)，HepG2細(xì)胞凋亡率達(dá)到15.7±1.21％。Surfactin作用時(shí)間由0h延長(zhǎng)至48h，G2/M期細(xì)胞的比例由11±2.1％增長(zhǎng)至25.3±2.3％，即細(xì)胞發(fā)生了G2/M期阻斷。這說(shuō)明surfactin能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，并發(fā)生G2/M期阻滯。
　　激光共聚焦實(shí)驗(yàn)表

3、明:在surfactin的作用下，細(xì)胞中的ROS水平在0-4h內(nèi)明顯升高，并誘導(dǎo)胞漿內(nèi)游離Ca2+濃度在0-9h明顯升高;Ca2+水平提高依賴(lài)于IP3R及RyR孔道的開(kāi)放;ROS及Ca2+能夠作用于線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng):誘導(dǎo)PT孔開(kāi)放，導(dǎo)致膜電位消失，誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;
　　利用Westernblotting、RT-PCR等手段研究發(fā)現(xiàn):在surfactin的作用下，ERK通路被阻斷，并受到胞漿Ca2+的調(diào)控;阻斷ERK通路能夠上調(diào)Bax