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1、持久性有機(jī)污染物是一類化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的化合物,不易在環(huán)境中降解,容易在脂肪組織中蓄積,并在食物鏈中積累與放大。滴滴涕(DDT)是一種典型的持久性有機(jī)污染物,盡管禁用多年,但在環(huán)境和食品中仍檢測(cè)出了DDT的存在。DDT嚴(yán)重危害人類健康,肝臟作為人體重要的解毒器官,容易受到DDT的攻擊,可誘發(fā)肝損傷甚至肝癌。槲皮素是一種廣泛存在于植物中的黃酮類化合物,具有抗氧化、抗炎癥、抗病毒和抗癌等生物活性。許多研究顯示,槲皮素可以拮抗多種外源性化合物對(duì)肝
2、臟的損傷,然而關(guān)于槲皮素對(duì)DDT誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷的拮抗效果及機(jī)制方面的研究,還沒有直接相關(guān)的報(bào)道。本研究以人正常肝細(xì)胞 HL-7702為體外模型,探討槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷的拮抗作用及其機(jī)制。研究內(nèi)容包括如下部分:
第一部分:通過MTT法檢測(cè)槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞存活率的影響;通過LDH實(shí)驗(yàn)檢測(cè)槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶的影響。結(jié)果表明,o,p’-
3、DDT可對(duì)人正常肝細(xì)胞HL-7702產(chǎn)生細(xì)胞毒性,而槲皮素可拮抗o,p’-DDT對(duì)肝細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
第二部分:通過單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn),檢測(cè)槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞DNA單鍵斷裂的影響;通過微核實(shí)驗(yàn),檢測(cè)槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞染色體損傷的影響;通過DNA蛋白質(zhì)交聯(lián)實(shí)驗(yàn),檢測(cè)槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞NDA交聯(lián)的影響。結(jié)果表明,o,p’-DDT可對(duì)人正常肝細(xì)
4、胞HL-7702產(chǎn)生基因毒性,而槲皮素可拮抗o,p’-DDT對(duì)肝細(xì)胞的基因毒性。
第三部分:通過DAPI染色檢測(cè)槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體的影響;通過Annexin V-FITC/PI流式分析檢測(cè)槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞凋亡的影響;通過 JC-1染色檢測(cè)槲皮素對(duì) o,p’-DDT誘導(dǎo)的 HL-7702細(xì)胞線粒體膜電位的影響;Western印跡檢測(cè)線粒體凋亡相關(guān)蛋白的變化
5、。結(jié)果表明, o,p’-DDT可誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞HL-7702凋亡,而槲皮素可拮抗o,p’-DDT誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡,且這種作用是通過調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白產(chǎn)生。
第四部分:通過檢測(cè)ROS水平,以及抗氧化酶活性,包括超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH),研究槲皮素對(duì)o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響;通過熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NADPH氧化酶系相關(guān)基因的表達(dá);West
6、ern印跡檢測(cè)細(xì)胞漿和細(xì)胞核中Nrf2的表達(dá)。結(jié)果表明,o,p’-DDT可誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞HL-7702細(xì)胞氧化應(yīng)激。槲皮素通過抑制NADPH氧化酶系相關(guān)基因的表達(dá),同時(shí)誘導(dǎo)Nrf2從細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi),激活抗氧化酶的活性,抑制o,p’-DDT誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激。
綜上所述,槲皮素能通過抑制NADPH氧化酶和促進(jìn)Nrf2核轉(zhuǎn)移,激活肝細(xì)胞的抗氧化酶活性,調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平,從而拮抗o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-770
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