蓮房原花青素對乙醇誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷的拮抗作用.pdf

1、原花青素(Procyanidins,簡稱PC),是一大類多酚化合物的總稱,廣泛分布于植物界,也存在某些飲料(茶葉、啤酒)、蔬菜、水果和糧食中,與人類生活和健康密切相關(guān)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),蓮房(seedpod of helotus,LS)中原花青素含量豐富,其結(jié)構(gòu)、組成與葡萄籽原花青素極為相似。并且在動(dòng)物水平上研究發(fā)現(xiàn),原花青素具有抗氧化、抗炎、抗心肌缺血-再灌注損傷、保護(hù)肝臟、抗輻射、抗腫瘤、抗突變和增強(qiáng)免疫力等多種藥理作用。
　　本實(shí)

2、驗(yàn)通過研究蓮房原花青素(lotus seedpod procyanidins,LSPC)對乙醇引起人肝L-02細(xì)胞氧化應(yīng)激、DNA損傷、染色體損傷以及對凋亡的拮抗作用,為進(jìn)一步開發(fā)利用原花青素提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本文主要從以下三個(gè)部分展開論述：
　　第一部分:LSPC拮抗乙醇所致的氧化應(yīng)激作用
　　本部分主要研究了蓮房原花青素對乙醇引起的人胚肝 L-02細(xì)胞株內(nèi)谷胱甘肽(Glutamylcysteinylglycine

3、,GSH)、丙二醛(Malonyldiadehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、過氧化氫酶(Catalase,CAT)以及活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)含量的影響。分別采用化學(xué)比色法、熒光探針(2,7-dichloro fluoresceinciactate,DCFH-DA)的方法檢測原花青素對人胚肝細(xì)胞 L-02細(xì)胞株內(nèi)MDA、GSH、SOD、CAT

4、和ROS的含量的影響。本實(shí)驗(yàn)中設(shè)計(jì)了8組濃度,分別為正常對照組,單獨(dú)的200mmol/L乙醇組,單獨(dú)5、10、25mg/L的LSPC組以及5、10、25mg/L的LSPC與200mmol/L乙醇共同作用于肝細(xì)胞L-02,結(jié)果發(fā)現(xiàn)200mmol/L的乙醇能刺激性的升高肝細(xì)胞L-02中MDA、ROS、GSH、CAT的含量(P<0.05)。與乙醇組相比,5和10mg/L的LSPC能升高肝細(xì)胞L-02中GSH、SOD、CAT的含量,并降低MDA

5、、ROS的生成(P<0.05),25mg/L的LSPC對乙醇所致的氧化應(yīng)激損傷的拮抗作用不明顯。
　　第二部分: LSPC對乙醇所致DNA損傷和修復(fù)的作用的影響
　　本部分主要研究了不同濃度的蓮房原花青素對乙醇引起人胚肝 L-02細(xì)胞株DNA損傷和修復(fù)作用的影響。以單細(xì)胞凝膠電泳(Single Cell Gel Electrophoresis,SCGE)和RT-PCR(Reverse Transcription Polyme

6、rase Chain Reaction)的方法分別檢測原花青素對乙醇所致的肝細(xì)胞DNA斷裂損傷的拮抗作用和對DNA損傷修復(fù)酶表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)分組同上。結(jié)果發(fā)現(xiàn)5和10mg/L的 LSPC能顯著降低乙醇所引起的DNA雙鏈損傷并且顯著升高ERCC1、hMSH2、DNA-PKcs的表達(dá)(P<0.05),而高劑量組(25mg/L)的LSPC無顯著作用。
　　第三部分:LSPC對乙醇所致染色體損傷和凋亡的拮抗作用
　　本部分運(yùn)用細(xì)胞松