原花青素對內毒素誘導的腸道屏障損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、原花青素(Proanthocyanidin，PC)是自然界中廣泛存在的一大類多酚類聚合物的總稱，研究表明其安全性較高，具有豐富的生物學作用，在人體的生物利用率也很高，在營養(yǎng)、醫(yī)藥、保健等領域的應用日益廣泛。內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的一部分，又稱脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，能誘導腸粘膜促炎因子表達升高，引起腸道炎癥反應，導致粘膜功能障礙，從而使腸粘膜受損，致使細菌易位，引起遠隔器官感染。本研究分別以大鼠腸

2、隱窩上皮細胞(IEC-6)和雄性SD大鼠為研究對象，用內毒素誘導炎性損傷，給予不同劑量的原花青素干預，從體外和體內水平觀察其對內毒素誘導的炎性損傷的影響，探討原花青素對內毒素誘導的腸道屏障損傷的保護作用及其相關機制。
　　目的
　　1、研究原花青素對內毒素誘導的大鼠腸隱窩上皮細胞毒性的影響。
　　2、研究原花青素對內毒素誘導的大鼠腸道屏障損傷的影響。
　　3、探討原花青素對內毒素誘導的腸道屏障損傷的保護作用機制。

3、
　　方法
　　1、通過MTT試驗、HE染色法和細胞創(chuàng)傷愈合試驗檢測原花青素對LPS誘導損傷的IEC-6細胞增殖、分化和遷移的影響。通過倒置顯微鏡觀察原花青素對LPS誘導損傷的IEC-6細胞形態(tài)學變化的影響。
　　2、通過ELISA試驗檢測原花青素對LPS誘導損傷的IEC-6細胞分泌腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-1β(IL-1β)水平的影響。
　　3、對SD大鼠進行原花青素灌

4、胃兩周后，腹腔注射LPS，6小時后處死。通過觀察大鼠臨床表現(xiàn)、血清TNF-α檢測、血清D-乳酸水平測定以及小腸粘液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)測定來探討原花青素對LPS誘導的大鼠腸道屏障損傷的影響。
　　4、通過實時熒光定量PCR試驗(qRT-PCR)和Western Blot試驗檢測原花青素對LPS誘導損傷的IEC-6細胞緊密連接蛋白occludin和claudin-1 mRNA表達水平及occludin蛋白表達水平的影響。<

5、br>　　結果
　　1、原花青素對LPS誘導損傷的IEC-6細胞增殖、分化、遷移具有促進作用，并呈現(xiàn)劑量-效應關系，且隨著原花青素干預時間的延長，細胞遷移率呈上升的趨勢。細胞形態(tài)學研究表明，原花青素對LPS誘導引起的細胞形態(tài)變化和細胞密度降低具有改善作用。
　　2、ELISA結果顯示原花青素能夠抑制LPS誘導損傷后IEC-6細胞TNF-α、IL-6和IL-1β分泌水平的上升，并且呈現(xiàn)劑量-效應關系。
　　3、動物實驗結

6、果顯示腹腔注射LPS后，大鼠出現(xiàn)倦怠及抖動，皮毛蓬松無光澤、呼吸急促、精神萎靡，腹瀉、腹脹等臨床表現(xiàn)，血清TNF-α分泌水平上升，血清D-乳酸含量增加，小腸粘液分泌型免疫球蛋白A合成降低。而原花青素能夠緩解LPS誘導后的腸道炎癥，改善大鼠的各種臨床癥狀，降低血清TNF-α分泌水平和血清D-乳酸水平，提高小腸粘液分泌型免疫球蛋白A的含量。
　　4、實時熒光定量PCR試驗結果顯示原花青素能夠提高LPS誘導損傷的IEC-6細胞occlu

7、din和claudin-1 mRNA的表達水平。Western Blot試驗結果顯示原花青素能夠提高LPS誘導損傷的IEC-6細胞緊密連接蛋白occludin的蛋白表達水平。
　　結論
　　原花青素對LPS誘導損傷的IEC-6細胞增殖、分化、遷移具有促進作用，能夠降低TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平。原花青素對LPS誘導引起的大鼠腸道屏障損傷有保護作用，體現(xiàn)在改善臨床不良癥狀、降低血清TNF-α和D-乳酸水平、提高