原花青素對鉛誘導(dǎo)的大鼠肝毒性的保護作用研究.pdf

1、鉛(Lead，Pb)具有柔軟、高延展性和抗腐蝕等特點，被廣泛應(yīng)用到現(xiàn)代工業(yè)中，尤其是在發(fā)展中國家。盡管全球范圍內(nèi)已經(jīng)采取了各種措施來控制Pb污染，但是每年仍約有2萬噸的Pb以煙塵的形式排放到空氣中，對人畜健康產(chǎn)生巨大的威脅。約33％被吸收入血的Pb會儲存到肝臟中，對肝臟造成嚴重的損傷。因此，有效地減少Pb在肝臟內(nèi)的蓄積和對肝組織的損傷是亟待解決的問題。葡萄籽提取物原花青素(Grape seed proanthocyanidin extr

2、act，GSPE)是一種天然抗氧化劑，具有抗炎、抗細菌、抗癌、保護心臟、肝臟和神經(jīng)等多種生物學(xué)作用。本研究采取體內(nèi)試驗和體外試驗相結(jié)合的方法，來研究GSPE對Pb誘導(dǎo)的大鼠肝臟的損傷、在肝臟和骨中的蓄積、血細胞DNA損傷、氧化應(yīng)激和細胞凋亡水平的保護作用。
　　體內(nèi)試驗選用6-8周Wistar大鼠40只，隨機分成4組，分組情況為Control組、GSPE組、Pb組和Pb+GSPE組，試驗周期為30 d。Control組大鼠自由飲水

3、，每天灌服用于溶解GSPE的生理鹽水;GSPE組大鼠自由飲水，每天灌服200 mg/kg GSPE溶液;Pb組大鼠飲水中添加2.51 g/L醋酸鉛，每天灌服生理鹽水;Pb+GSPE組大鼠飲水中添加2.5 g/L醋酸鉛，每天灌服GSPE（200 mg/kg）溶液。30d后，采取試劑盒方法檢測氧化應(yīng)激相關(guān)指標（超氧化物歧化酶、谷胱甘肽和丙二醛）、細胞凋亡和DNA損傷，生化分析儀測定肝功能指標丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotrans

4、ferase，ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate transaminase，AST），采用血球分析儀測定紅細胞(Red blood cell，RBC)數(shù)量和血紅蛋白(Hemoglobin，Hb)濃度，火焰原子吸收光譜法測定肝臟和骨中的Pb含量，免疫印跡試驗檢測Nrf2信號通路和細胞凋亡信號通路相關(guān)蛋白的表達水平。
　　體外試驗原代培養(yǎng)Wistar大鼠肝細胞，經(jīng)糖原染色鑒定肝細胞后，分別進行Pb和GSPE添加，分組如下:C

5、ontrol組、GSPE組(100 mg/L)、Pb組（100μM）和Pb(100μM)+ GSPE(100 mg/L)組，GSPE先添加2h，然后加入Pb孵育24 h，采用試劑盒的方法，按照說明書提供的方法檢測肝細胞活率、乳酸脫氫酶釋放和肝細胞活性氧（Reactive oxygen species，ROS）水平。
　　結(jié)果表明:GSPE能夠緩解Pb誘導(dǎo)的RBC數(shù)量下降和Hb濃度的降低。由ALT、AST活性和肝組織病理切片結(jié)果可見

6、，GSPE的添加有效地減弱Pb對肝臟的損傷。與Control組相比，Pb組超氧化物歧化酶和谷胱甘肽水平顯著降低，丙二醛含量顯著增加，這些指標提示機體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，而GSPE減弱了Pb誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。Pb組肝臟和骨中Pb含量增加，GSPE處理后骨中的Pb蓄積明顯降低;同時，GSPE降低了肝細胞凋亡水平和DNA損傷程度。Pb+GSPE組Nrf2通路相關(guān)蛋白Nrf2、Keap1、NQO1和HO-1蛋白表達顯著高于Pb組。與Pb組相比，GS