葡萄籽原花青素對(duì)大鼠煙霧吸入性肺損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　建立適用于煙霧吸入性肺損傷研究的動(dòng)物模型，并使其具有穩(wěn)定性、可重復(fù)性。觀察煙霧吸入性肺損傷大鼠在不同時(shí)期的表現(xiàn)、肺組織生化環(huán)境變化、肺組織病理形態(tài)改變等，評(píng)價(jià)此動(dòng)物模型的可靠性并分析煙霧吸入性肺損傷的發(fā)生、發(fā)展過程。觀察腹腔注射葡萄籽原花青素（GSPE）的安全性，探討GSPE對(duì)煙霧吸入性肺損傷大鼠的保護(hù)作用。
　　方法：
　　1．建立煙霧吸入性肺損傷大鼠模型
　　選用2月齡雄性SD大鼠48只，體重為2

2、20～250g。實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，完全隨機(jī)選用8只大鼠為正常組（A組），其余大鼠參照第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院燒傷病研究所的方法建立煙霧吸入性肺損傷動(dòng)物模型，吸煙10分鐘后間隔5分鐘，重復(fù)3次。制模完畢立即測(cè)量大鼠呼吸頻率，呼吸頻率大于30次/分的納入下一步實(shí)驗(yàn)。
　　2．實(shí)驗(yàn)分組
　　將制模成功的大鼠完全隨機(jī)分為2組：B組，模型組（致傷未治療組），給予腹腔注射3ml雙蒸水；C組，GSPE治療組，給予腹腔注射GSPE雙蒸水溶

3、液3ml(500mg/kg)。
　　3．標(biāo)本留取
　　于致傷后各時(shí)間點(diǎn)（2h、4h、12h、24h）分批腹腔注射1％戊巴比妥鈉生理鹽水溶液（30mg/kg）行麻醉。行大鼠頸總動(dòng)脈插管，留取頸動(dòng)脈血1ml進(jìn)行血?dú)夥治?。而后頸動(dòng)脈插管放血至大鼠血流盡，暴露胸腔，取出肺組織。取1cm×1cm右上肺用10％甲醛溶液固定留作HE染色，取部分右下肺留作濕／干重(W／D)測(cè)量，剩余肺組織做好標(biāo)記，放入-70℃冰箱凍存，留用制備組織勻漿。<

4、br>　　4．監(jiān)測(cè)指標(biāo)
　　分別取各組大鼠肺組織進(jìn)行肺組織濕/干重測(cè)定。左肺稱重后手工勻漿，制成10％勻漿液，離心后取上清液，分別測(cè)定測(cè)量超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、一氧化氮合酶（NOS）的活性和丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）的含量。取固定好的肺組織，制作病理切片，行HE染色，觀察病程中各個(gè)階段的病理變化。
　　結(jié)果：
　　1．大鼠的一般情況
　　致傷后B、C組大鼠呼吸頻率均

5、大于30次/分，先為呼吸淺快，繼而出現(xiàn)呼吸頻率逐漸減慢，張口呼吸，哮鳴音、精神萎靡、行動(dòng)遲緩等癥狀。GSPE治療組大鼠較模型組大鼠呼吸頻率減慢，精神尚可。
　　2．大鼠造模評(píng)價(jià)
　　模型組大鼠的肺組織濕/干重均顯著高于正常對(duì)照組（P<0.05），動(dòng)脈血氧分壓明顯低于正常對(duì)照組（P<0.05）。肉眼觀正常組大鼠肺組織表面光滑，無出血點(diǎn)，而致傷組大鼠肺組織表面濕潤，有散在出血點(diǎn)，切面可見泡沫樣液體滲出。光鏡下，正常對(duì)照組大鼠肺組

6、織結(jié)構(gòu)清晰，肺間質(zhì)無增生。致傷組大鼠可見肺泡壁破裂，肺內(nèi)小血管充血，肺泡和肺間質(zhì)中有大量中性粒細(xì)胞浸潤。
　　3．GSPE對(duì)大鼠的影響
　　GSPE對(duì)大鼠動(dòng)脈血?dú)獾挠绊懀赫＝M大鼠動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)均維持在較高水平（>94mmHg）。以正常組大鼠PaO2為標(biāo)準(zhǔn)，模型組大鼠致傷后PaO2開始下降，傷后4h降至最低，較正常組下降29.3％（27.6mmHg），它們之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。而GSPE抑制了這

7、種煙霧吸入傷后PaO2的下降趨勢(shì)，GSPE治療組在致傷后4h時(shí)大鼠PaO2較模型未治療組升高31.4％（21mmHg）。在致傷后24h時(shí)GSPE治療組大鼠動(dòng)脈血氧分壓上升至正常水平，GSPE治療組與未治療組之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　GSPE對(duì)大鼠肺組織含水量的影響：以正常組大鼠肺組織含水量為標(biāo)準(zhǔn)，致傷后模型組肺組織含水量明顯升高，差異有顯著性(P<0.05)，GSPE治療組肺組織含水量較模型組明顯降低(P<0

8、.05)，與正常對(duì)照組比較仍有所升高，但差異無顯著性（P>0.05）。
　　GSPE對(duì)大鼠肺組織生化環(huán)境的影響：與正常對(duì)照組相比，模型組SOD、GSH-PX活性均明顯降低（P<0.05），GSPE治療組SOD、GSH-PX活性相較模型組均明顯升高（P<0.05），且較正常對(duì)照組均無明顯差異（P>0.05）。而與正常對(duì)照組相比，模型組MDA活性明顯升高（P<0.05），GSPE治療組MDA活性較模型組降低（P<0.05），但較正常對(duì)

9、照組無明顯差異（P>0.05）。模型組TNOS活性和NO含量均較正常對(duì)照組有明顯升高（P<0.05）。GSPE治療組較模型組TNOS活性和NO含量均明顯降低，差異有顯著性（P<0.05），但GSPE治療組TNOS活性及NO含量較正常對(duì)照組仍升高，差異有顯著性（P<0.05）。
　　GSPE對(duì)大鼠肺組織病理改變的影響：HE染色顯示，正常對(duì)照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁完整，肺間質(zhì)無增生。模型組大鼠可見肺泡壁破裂，肺內(nèi)小血管充血，肺泡

10、和肺間質(zhì)中有大量中性粒細(xì)胞浸潤，而GSPE治療組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)大致清晰，炎性細(xì)胞浸潤也較模型組明顯減少。
　　結(jié)論：
　　反復(fù)多次煙霧吸入可誘導(dǎo)成年大鼠出現(xiàn)張口呼吸、精神萎靡、低氧血癥等肺損傷表現(xiàn)，并發(fā)生急性肺損傷的病理學(xué)改變。
　　煙霧吸入后，大鼠表現(xiàn)出一系列肺損傷表現(xiàn)，通過GSPE能有效的抑制由此引起的低氧血癥，提高肺組織抗氧化能力，抑制過度的炎性反應(yīng)，減輕肺水腫，這可能是與GPSE強(qiáng)抗氧化能力和抗炎作用相關(guān)。GS