過氧化氫誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過程中PI3K-Akt通路與JNK-SAPK通路的變化.pdf

1、[背景]現(xiàn)代觀點(diǎn)認(rèn)為，在胰島素抵抗導(dǎo)致β細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，繼而進(jìn)展為糖尿病及其晚期并發(fā)癥的病程中，以及在冠心病的發(fā)病過程中，氧化應(yīng)激為共同機(jī)制。氧化應(yīng)激的主要機(jī)制是胞內(nèi)活性氧(ROS)產(chǎn)生增加，激活胞內(nèi)應(yīng)激敏感通路，介導(dǎo)細(xì)胞損傷。已知細(xì)胞內(nèi)存在多種氧化應(yīng)激相關(guān)的通路，包括NF-κB、p38MAPK、JNK/SAPK通路等。 細(xì)胞凋亡是能量依賴的細(xì)胞內(nèi)死亡程序活化而致的細(xì)胞自殺，是由基因控制的細(xì)胞自主有序的主動(dòng)死亡過程。近年

2、來研究表明，氧化應(yīng)激可以導(dǎo)致細(xì)胞異常凋亡，許多能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的理化因素也能導(dǎo)致氧化應(yīng)激。細(xì)胞內(nèi)與凋亡相關(guān)的應(yīng)激敏感通路包括PI3K/Akt通路、JNK/SAPK通路等。其中PI3K/Akt通路為抗凋亡通路，JNK/SAPK通路為促凋亡通路。研究表明在多種細(xì)胞中PI3K/Akt通路與JNK/SAPK通路存在交互作用。 [目的]研究在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)血管內(nèi)皮ECV304細(xì)胞凋亡過程中的早期，抗凋亡通路PI3K/Akt通路及促凋亡通路JN

3、K/SAPK通路的變化情況，及在此過程中這兩條通路的相互關(guān)系。 [方法]用PI3K通路抑制劑wortmannin(100nM)和JNK通路抑制劑SP600125(20μM)分別處理培養(yǎng)的ECV304細(xì)胞，暴露于750μM過氧化氫(H2O2)，用Westernblot方法檢測(cè)p-Akt、Akt、p-JNK、JNK含量的變化，用Hoechst染色、流式細(xì)胞儀技術(shù)及Westernblot方法測(cè)caspase3、caspase9活性來檢

4、測(cè)凋亡。 [結(jié)果]H2O2刺激后ECV304細(xì)胞發(fā)生明顯凋亡。在此過程早期，PI3K/Akt通路、JNK被顯著激活，wortmannin可抑制Akt通路的激活，使細(xì)胞凋亡比例增加，對(duì)JNK活性無明顯影響。SP600125可抑制JNK通路的激活，細(xì)胞凋亡比例減少，對(duì)Akt活性無明顯影響。 [結(jié)論]H2O2刺激可以引起ECV304細(xì)胞凋亡，此過程早期，PI3K/Akt、JNK通路被顯著激活，未發(fā)現(xiàn)這兩條通路的明顯相互關(guān)系。