大黃素對高糖狀態(tài)下人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷及PI3K-AKT信號通路影響的研究.pdf

1、目的：探討大黃素是否可能通過PI3K/Akt信號通路對高糖環(huán)境下的人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）一氧化氮（NO）的影響。
　　方法：①培養(yǎng)HUVECs，用MTT法篩選大黃素的實驗濃度。②硝酸還原酶法檢測不同糖濃度下NO分泌，將HUVECs隨機分為正常對照組(NG組，葡萄糖濃度5.5mmol/L)，高糖濃度組(HG組，葡萄糖濃度11.1mmol/L，22.2 mmol/L，33.3 mmol/L)。③硝酸還原酶法檢測高糖33.3m

2、mo/L培養(yǎng)HUVECs不同時間（0，24，48，72小時）下NO分泌。④高糖33.3mmol/L環(huán)境下培養(yǎng)細胞48小時，將HUVECs隨機分為高糖33.3mmol/L度組，高糖33.3mmol/L+大黃素組，高糖33.3mmol/L+LY294002組，高糖33.3mmol/L+大黃素+LY294002組，硝酸還原酶法檢測各組對NO分泌的影響⑤應(yīng)用Western blot檢測各組48h時p-Akt(Ser473)的表達。
　　結(jié)

3、果：①10μmol/L大黃素濃度時 HUVECs生長良好（p<0.05）；②不同糖濃度下，正常對照組的NO值分別較其他組明顯增加（p<0.05）；③高糖33.3mmol/L組培養(yǎng)，與0h組相比，24h組NO分泌量增加（p<0.05），48h、72h減少（p<0.05）；④高糖33.3mmol/L組，高糖33.3mmol/L+大黃素組，高糖33.3mmol/L+LY294002組，高糖33.3mmol/L+LY294002+大黃素組的NO

4、分泌，高糖33.3mmol/L+LY294002組分別較其他組明顯減少（p<0.05）；大黃素可改善LY294002抑制作用，大黃素組的NO值分別較其他組明顯增加（p<0.05）；⑤在高糖濃度，大黃素組的p-Akt(Ser473)蛋白灰度值較Control、LY294002組和大黃素+LY294002組均有明顯增加（p<0.05）；大黃素+LY294002組中p-Akt(Ser473)蛋白灰度值較LY294002組也有明顯的增加（p<0